张 扬，姚文成，王 彬，卢立志，王兆山，徐 琪，常国斌，陈国宏，*

(1.扬州大学 动物科学与技术学院，江苏 扬州 225009； 2.浙江省农业科学院 畜牧兽医研究所，浙江 杭州 310021； 3.江苏益客食品有限公司，江苏 宿迁 223800)

据《事物绀珠》记载，400年前明代饲养有“顶有高毛、白毛、乌骨”的凤头白羽鸭[1]。本课题组经过选育，培育出3 000只具有典型凤头性状的凤头白鸭(暂定名)群体[2]。该群体鸭头部后方的皮肤有一突出的隆起，具有鲜明的观赏特征，可作为动物园、水景湿地公园等观赏品种[3]。虽然凤头性状现已得到一定的利用，但其遗传规律、形成原因以及调控机制尚未阐明。本研究选取了可能与凤头白鸭凤头性状相关的基因作为候选因果基因，对这些基因在2种鸭内脏和皮肤等组织中的表达量进行对比分析，寻找其差异，以期为揭示鸭凤头表型的产生和寻找其致因突变位点提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

选取10周龄凤头白鸭、连城白鸭各4只，颈部放血后采集心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、小脑、背部皮肤、头部皮肤、凤头下皮肤、凤头颅内脂肪体等组织样品，贮存在-70 ℃超低温冰箱备用。

1.2 引物设计

根据NCBI网站GenBank收集的鸭Hoxc8、EphA2、EphA3、EphB2、GAPDH基因序列，利用Primer Blast设计引物，由生工生物工程公司(上海)进行合成。引物序列见表1。

1.3 基因的PCR扩增

采用Trizol研磨法提取2个群体共计8个样品的总RNA，自然干燥后溶于甲酰胺中，-70 ℃保存备用。反转录体系如下：1 μg总RNA样品，1 μL随机引物，4 μL 25 mmol·L-1MgCl2，2 μL 10×RT缓冲液，2 μL dNTP，0.5 μL RNA酶抑制剂，1 μL反转录酶，加入RNase-free H2O至20 μL。反转录程序参照北京天根生物科技有限公司的逆转录试剂盒进行，42 ℃孵育15 min后立即95 ℃孵育5 min，获得的cDNA -20 ℃保存备用。……