龙根 苏竹毅 谢敏杰 王伟 徐沙贝 刘晨辰

细胞周期是细胞生命活动的重要特征和基本过程，其运行主要通过细胞周期蛋白依赖性激酶(Cyclin-dependent kinases，Cdks)的蛋白激酶家族进行调节[1]。其中，细胞周期蛋白依赖性激酶5(Cdk5)作为Cdks家族的一员，是一种脯氨酸介导的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其氨基酸序列与Cdk2和细胞分裂周期激酶2(cdc2)有60%的同源性[2-3]。然而相比于其他细胞周期依赖性激酶，在中枢神经系统高度表达的Cdk5并不直接参与细胞周期，并且需要与非细胞周期调节亚基蛋白 p35和p39以及它们的截短形式p25和p29结合才能产生活性[4]。Cdk5在中枢神经系统正常生长发育调节神经细胞迁移、轴突生长、神经递质释放、突触可塑性及认知功能等方面发挥重要作用[5-7]，然而Cdk5在星形胶质细胞增殖过程中的作用尚不明确。本研究采用RNA干扰技术特异性沉默Cdk5，观察其对星形胶质细胞增殖的影响，探讨Cdk5在星形胶质细胞增殖中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

新生24 h内的SPF级SD大鼠乳鼠，购于华中科技大学同济医学院实验动物中心。DMEM/F12、胎牛血清(美国Hyclone公司)，Opti-MEM(美国Gibco公司)，小鼠抗大鼠GFAP抗体(美国Neomarkers公司)，兔抗大鼠Cdk5抗体(美国Santa Cruz公司)，FITC标记羊抗兔IgG、Cy3标记羊抗兔IgG、HRP标记羊抗小鼠IgG、HRP标记羊抗兔IgG(美国Jackson ImmunoResearch公司)，Edu试剂盒(上海锐博公司)，Lipofectamine2000(美国Invitrogen公司)，RT-PCR试剂盒(日本TaKaRa公司)，Cdk5引物及内参(上海生工生物工程股份有限公司)。设计3种作用于星形胶质细胞Cdk5的干扰序列为目的的siRNA分别为Si-r-Cdk5-001、Si-r-Cdk5-002及Si-r-Cdk5-003(表1)，由广州锐博生物有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 星形胶质细胞原代培养和……