张中华，赵亚兰

甘肃省中医院药学部，甘肃 兰州 730050

黄连为毛茛科植物黄连(Coptis.chinensis Franch.)、三角叶黄连(Copfis.deltoidea C.Y.Chenget Hsiao)或云连(Coptis.teeta wall)的干燥根茎，作为中药始载于东汉《神农本草经》，被列为上品［1］。其性寒味苦，可清热燥湿，泻火解毒。《名医别录》记载黄连可“止消渴”；《本草纲目》也有“治消渴，用酒蒸黄连”的记载。而黄连苦寒能泻上、中、下三焦之火，火去则津液无煎，消渴自止。黄连苦寒，善清心火，火去则不吸烁真阴，肾水得复，况黄连苦寒亦可厚肠胃以坚阴，故消渴者，黄连何畏［2］。黄连为我国传统中草药，有着长期的药用历史以及丰富的民间用药经验，它含小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱、巴马亭，药根碱等多种生物碱，并含黄酮(已发现的苷元有槲皮素与金合欢素)、黄柏内酯等［3］。有学者研究表明，从黄连中提取的小檗碱、黄连碱、巴马亭以及黄连的醇提取物均能有效地促进5-氟尿嘧啶的透皮吸收，增加极性药物在皮肤中的浓度，与表面活性剂一样具有增加皮肤渗透性的作用［4］。天然透皮吸收促进剂以起效快、效果好、副作用小等优点，正日益引起人们的重视。因此，从天然产物中寻找透皮吸收促进剂，具有广阔的应用前景［5］。

1 仪器与试药

1.1 仪器 UV-1800PC型紫外分光光度计；BT 125D分析天平(感量0.01 mg)；JY4001型电子秤(上海精科天平仪器厂)；PTHW型调温电热套(2000ML，420 W巩义市予华仪器有限责任公司)；通一牌DW 1 000 ML型套式调温电热套(500 W江苏通州市电热器厂)；循环水多用真空泵(SHB-3型郑州杜甫仪器厂)；恒温水浴锅(金坛市大地自动仪器厂)；HC-TP11-5架盘药物天平(感量0.5 g上海第二天平仪器厂)；SB-5200 DTD超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)；CS101型电热鼓风干燥箱(中国重庆试验设备厂)。

1.2 试药 黄连饮片(购自兰州复兴厚药材有限责任公司)，甘肃中医药大学药学系中药药剂教研室魏舒畅副教授鉴定为药典收载品种；盐酸小檗碱(对照品，购自中国药品生物制品鉴定所，批号：110713-200609，盐酸小檗碱含量98.1%)。硫酸、盐酸、氢氧化钙、氨水、95%乙醇，均为分析纯。

2 方法与结果［2-6］

2.1 黄连提取物的制备

2.1.1 黄连总生物碱的提取 取500 g黄连粗粉，加22倍量70%乙醇回流提取3次，每次1小时，提取液回收乙醇，将稠膏在水浴锅上浓缩至干燥；同法再提取黄连粗粉1 000 g。得干膏419.2 g，出膏率为27.9%。将干膏(提取物Ⅰ)置干燥器内，待进一步分离纯化小檗碱用。

2.1.2 黄连总生物碱的纯化 取100.4 g干膏置1 000 mL烧杯内，加10倍量0.5%H2SO4溶解，静置，过滤，得酸水液；在酸水液中加石灰乳调PH至9，过滤，得滤液A；在滤液A中加浓盐酸调PH至1，加入药液量8%的氯化钠盐析，放置，过滤，得沉淀A与滤液B；将在沉淀A溶于1 000 mL热水，调PH至9，趁热过滤，在滤液中，并将沉淀水洗至中性，得母液(提取物Ⅱ)与盐酸小檗碱粗品；在滤液B中加氨水调PH至9，放置，过滤，得沉淀，并将沉淀用乙醇重结晶，得小檗胺(提取物Ⅲ)。同法再处理200 g干膏。最后将得到的盐酸小檗碱粗品再溶于热水，加盐酸调PH至3，放置，过滤，得较纯盐酸小檗碱(提取物Ⅳ)。

2.2 黄连总生物碱的含量测定

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品1.18mg，置于10mL容量瓶中，用0.05mol H2SO4溶解并定容至刻度，摇匀；从上述溶液中精密移取2.5 mL至10 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4定容至刻度，摇匀，得对照品贮备液。

2.2.2 供试品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱供试品7.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4溶解并定容至刻度，摇匀；从上述溶液中精密移取1.0 mL至10 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4定容至刻度，摇匀。

2.2.3 测定波长的确定 取对照品储备液与供试品溶液，以0.05 mol H2SO4为空白，波长自200～800 nm，扫描间隔为1 nm，对对照品与供试品进行最大波长扫描，在最大吸收峰处确定测定波长为264 nm，扫描图谱见图1。

图1 盐酸小檗碱对照品和供试品最大波长扫描图谱

2.2.4 供试品的含量测定 精密称取盐酸小檗碱标准供试品7.0 mg，置于100 mL容量瓶中，用0.05 mol H2SO4溶解并定容至刻度，摇匀；精密量取供试品液1.0mL至10 mL容量瓶中，用0.05 molH2SO4定容至刻度，摇匀，以0.05molH2SO4硫酸为空白对照，在264nm波长处测定吸光度。

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察 精密量取对照品储备液0.2、0、0.8、1.2、1、2、3.0 mL 分别至 10 mL 容量瓶中，用0.05 mol H2SO4定容至刻度，摇匀，以0.05 mol H2SO4为空白对照，在264 nm处测定吸光度，其吸光度值见表1。

表1 对照品浓度与对应的吸光度值

以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标，绘制标准曲线，见下图。

线性方程为 A=79.617C-0.022，r=0.999 9，盐酸小檗碱在0.579～8.682 μg/mL范围内，浓度与吸光度呈现良好的线性关系。

2.3.2 稳定性实验 取同一批次的供试品溶液，分别于 0﹑1、2﹑3﹑5、8 小时进样测定，测定结果的稳定性好，结果见表2。

表2 不同时间测定样品中总生物碱的吸光度值

2.3.3 精密度实验 取供试品溶液，在264 nm处重复测定其吸光度，结果表明仪器精密度良好。见表3。

表3 精密度试验结果

2.3.4 重复性试验 取同批供试品5份，每份取样量依次为 13.0、9.0、8.0、7.0、7.0 mg，分别按供试品溶液制备方法操作测定，计算盐酸小檗碱含量，结果表明试验重复性良好。见表4。

2.3.5 加样回收试验 取已知含量(71.4%)的供试品7.0 mg，按供试品溶液制备项下方法操作，制备供品溶液，精密吸取5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入盐酸小檗碱对照品储备液(0.0236mg/mL)1 mL用0.05 M硫酸定容至刻度，摇匀，分别测定其吸光度，结果表明回收率及RSD值可确定加样回收率符合规定。见表5。

2.4 供试品含量测定 取不同批号的供试品，按测定法项下的方法操作并测定。供试品的测定结果表明黄连中提取的总生物碱中盐酸小檗碱的含量为92.84%，可供透皮实验用。见表6。

表4 重复性室验结果

表5 回收率测定结果

表6 供试品中盐酸小檗碱的含量测定结果

3 结论

供试品中总生物碱的纯度较高，盐酸小檗碱的含量可达92.84%。采用紫外可见分光光度法测定黄连中总生物碱的含量，在测定波长过程中可能还有其他物质的吸收，会导致测定结果偏高［6］。

生物碱与黄酮等物质在70%的乙醇中溶解度都较好，因此药材粗粉用70%的乙醇提取；小檗碱的硫酸盐在水中溶解度较大(1∶30)，其盐酸盐在水中溶解度较小(1∶500)，因此将干膏用0.5%H2SO4溶解使生物碱成硫酸盐溶于水中。

酸水液中加石灰乳调至pH 10～12，一是吸附杂质，二是调碱性；碱液中加盐酸调至pH 1～2使生物碱的硫酸盐转变成盐酸盐，再加入药液量6%～10%氯化钠使盐酸盐反应完全［7］；析出的盐酸盐溶于热水，加石灰乳调至pH 8.5～9，是进一步除杂，在此碱液中加盐酸调至pH 2～3使生物碱以盐酸盐的形式再次结晶析出，对其进行纯化。

参考文献

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典［M］.一部.北京：中国医药科技出版社，2015：303-305．

［2］林汉钦，蔡培俊.浅谈黄连在糖尿病治疗中的作用［J］.中国中医药现代远程教育，2010，8(22)：45-46．

［3］匡海学，黄小萍，石任兵，等.中药化学［M］.北京：中国中医药出版社，2008:350-352.

［4］张仲源，张惠生，张丽敏.透皮促进吸收的中药材(三)［J］.中国外治杂志，2010，19(4):63-64.

［5］张慧，肖莉，许建辰，等.天然透皮吸收促进剂的研究进展［J］.中国药房，2005，16(4):303-304.

［6］龚涛，孙冰.黄连提取工艺的研究［J］.中草药，2008，29(7):446-448.