李卫奇，贾喜花，王晓博，赵 霞，王静苗，宋泰宁

（1.承德医学院，河北承德 067000；2.保定市第一中心医院）

结肠癌是癌症相关死亡的主要原因之一，90%以上的结肠癌患者死于局部复发和远处转移[1]。因此，深入研究结肠癌浸润转移的分子机制对改善患者的总生存期具有重要意义。锌指E盒同源结合蛋白-1(zinc finger E box homologous protein-1，ZEB1)是锌指结构转录因子家族的重要成员，其两侧的锌指簇能与特定核苷酸序列结合，进而调节下游靶基因的转录，参与肿瘤的发生发展[2]。赖氨酰氧化酶-2(lysyloxidase-2，LOXL2)是赖氨酰氧化酶家族的成员之一，可催化特定赖氨酸残基中的氨基集团的氧化脱酰胺基作用区域，导致弹性和胶原蛋

白的共价交联，进而增加基质刚度，促进癌细胞的侵袭[3]。目前，在结肠癌中ZEB1及LOXL2相互作用的研究较少。本研究采用免疫组化MaxVision法检测了ZEB1和LOXL2在结肠癌中的表达情况，并分析了二者与结肠临床病理征的关系，以及结肠癌中二者表达的相关性，进一步探究了ZEB1和LOXL2在结肠癌浸润转移过程中的作用机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取保定市第一中心医院2015年1月至2016年12月经手术切除且病理诊断为结肠腺癌的组织蜡块72例，患者手术前均未接受任何抗肿瘤治疗。其中包括男38例、女34例；年龄28～82岁(中位年龄56岁)；高分化26例、中分化31例、低分化15例；浸润深度T1-T234例，T3-T438例；淋巴结转移阳性33例，阴性39例；采用2010年AJCC(美国联合癌症分类委员会)和UICC(国际抗癌联盟)修定的TNM分期：Ⅰ-Ⅱ期40例、Ⅲ-Ⅳ期32例。另取36例癌旁组织(距肿瘤边缘＞5cm)为对照组，经病理切片检查证实为正常组织，包括男19例、女17例，年龄28～79岁(中位年龄56岁)。

1.2 试剂和方法 免疫组化采用MaxVision法。兔抗人ZEB1多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司，兔抗人LOXL2单克隆抗体购自美国SAB公司；通用免疫组织化学MaxVision试剂盒和DAB显色试剂，购自福州迈新生物技术开发有限公司。ZEB1抗体、LOXL2抗体工作浓度1：100，具体染色步骤严格按照试剂盒说明书进行操作。以已知阳性组织切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定 ZEB1和LOXL2阳性表达产物为棕黄色颗粒，分别定位于细胞核和细胞浆。所有切片均由两位病理科医师在双盲情况下进行计分。ZEB1［4］：＞25%的细胞细胞核着色为阳性。LOXL2按照半定量积分法［5］：①每例标本随机观察10个(×400倍)高倍视野，计算阳性细胞数占细胞总数的百分比，阳性细胞百分率＜5%、10%～25%、25%～50%、＞50%分别计0、1、2、3分；②观察染色强度，未着色、浅黄色、棕黄色、棕褐色分别计0、1、2、3分；以①×②判定LOXL2的染色结果，0～3分为阴性，3分以上为阳性。

1.4 统计分析 采用SPSS 19.0软件进行统计分析，计数资料采用卡方检验，相关分析采用Spearman等级相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ZEB1和LOXL2在结肠癌中的表达 ZEB1和LOXL2在结肠癌组织中的阳性表达率分别为29.2%(21/72)和75.0%(54/72)，均明显高于癌旁组织[ZEB1 0%(0/36)，LOXL2 13.9%(5/36)]，组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 ZEB1、LOXL2表达与结肠癌临床特征的关系 结肠癌组织ZEB1和LOXL2表达与性别、年龄和分化程度无关(P＞0.05)；与TNM分期、浸润深度和淋巴结转移有关(P＜0.05)：ZEB1和LOXL2阳性表达率均为TNM分期Ⅲ-Ⅳ期明显高于Ⅰ-Ⅱ期，浸润深度T3-T4明显高于T1-T2，有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移。见表1：

表1 ZEB1和LOXL2表达与结肠癌临床病理特征的关系

2.3 结肠癌ZEB1和LOXL2表达的相关性 结肠癌组织中，ZEB1和LOXL2的表达呈正相关关系(r＝0.30，P＜0.05)。见表2：

3 讨论

ZEB1是E盒绑定蛋白家族中的重要成员，基因主要位于人类10号染色体上，可以调节包括波形蛋白及E-cad在内的多种基因转录，从而调节上皮间质转化，对肿瘤的侵袭迁移起重要作用[2，6-7]。近年来研究显示，ZEB1在胃癌[8]、胰腺癌[9]及肺癌[10]等多种肿瘤中过表达，并与肿瘤的局部浸润与远处转移呈正相关。本研究结果显示，结肠癌组织ZEB1的阳性表达率明显高于癌旁正常组织；进一步分析ZEB1与结肠癌临床病理特征的关系，ZEB1表达与浸润深度(T1-T214.7% vs T3-T442.1%)、TNM分期(Ⅰ-Ⅱ 12.5% vs Ⅲ-Ⅳ 50%)和淋巴结转移(无17.9%vs有42.4%)有关，提示ZEB1在结肠癌的发生发展及迁移侵袭中起重要作用。

LOXL2是赖氨酰氧化酶家族的一员，基因位于人染色体8p21.2-p23.3，可促进细胞外基质重塑，参与肿瘤血管生成，诱导上皮-间质转化，最终导致肿瘤的侵袭转移[3，11]。近年来研究发现，LOXL2在胃癌[12]、食管癌[13]及肝癌[14]等多种恶性肿瘤中过表达，并且升高的LOXL2与肿瘤的浸润转移及生存期短相关。本研究结果显示，结肠癌组织LOXL2的阳性表达率明显高于癌旁组织，提示LOXL2与结肠癌的发生有关；进一步分析LOXL2与结肠癌临床病理特征的关系，LOXL2表达与TNM分期(Ⅲ-Ⅳ90.6% vsⅠ-Ⅱ 62.5%)、浸润深度(T3-T486.8% vs T1-T261.8%)、淋巴结转移(有87.9%vs无64.1%)有关，提示LOXL2可能参与了结肠癌的侵袭转移过程。

有研究显示，ZEB1可与LOXL2启动子区域直接结合，增加LOXL2的表达，进而引起微环境中胶原的沉积和交联，最终导致肿瘤的侵袭和转移[10]。本研究结果显示，结肠癌组织ZEB1与LOXL2的表达呈正相关关系，提示在结肠癌的发生发展和侵袭转移过程中二者可能具有协同作用。

综上所述，ZEB1和LOXL2在结肠癌的发生发展和侵袭转移中可能存在相互作用，联合检测ZEB1和LOXL2可能对判定结肠癌的侵袭转移具有一定的临床价值。

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