黄学文， 潘 杰， 赵兰静， 吴 茵， 朱菊平

（华东疗养院检验科，江苏 无锡 214065）

目前，在人体内已发现700多种微小RNA（microRNA，miRNA）。功能学研究结果显示，miRNA 参与调控几乎所有细胞生命活动过程，在人类多种病理条件下均会发生表达量的变化，目前已被广泛用于肿瘤、血液病和心血管疾病等的研究中，并可能成为疾病治疗新的靶标和无创性诊断新的分子标志物[1-3]。

随着血浆（血清）游离miRNA在临床上的应用越来越广泛，血浆（血清）游离miRNA提取显得越来越重要。游离miRNA在正常人的血液中含量甚微，获得高浓度、高质量的游离miRNA是进行分子生物学研究的第一步，也是关键的一步。本研究对目前miRNA提取常用的2种方法即柱分离方法和TRIzol提取方法进行评价，以期掌握更好、更经济的miRNA提取方法，为下一步实验提供方法学依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取20名2016年10月20日来华东疗养院体检的志愿者作为研究对象，年龄35～55岁。全部研究对象乙型肝炎病毒血清标志物和丙型肝炎病毒血清抗体均为阴性，肝功能、肾功能、血脂和尿酸等生化指标正常，超声波检查证实肝、胆、脾、胰、肾无异常，X线、电子计算机断层扫描及内窥镜检查均正常。

1.2 方法

1.2.1 血浆的制备 采集所有研究对象体检时的空腹静脉血3 mL，加入含乙二胺四乙酸的BD抗凝管中，4 ℃ 1 900×g离心10 min，转移上层血浆至新的1.5 mL Eppendorf管中，然后4 ℃ 16 000×g离心10 min，吸取上清-80 ℃保存备用。

1.2.2 TRIzol法提取miRNA 取500 μL血浆，按照TRIzol试剂盒（美国Life公司）说明书进行RNA提取并溶解于35 μL焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarborate，DEPC）水中，-80 ℃保存备用。1.2.3 进口硅胶吸附柱法提取miRNA 取200 μL血浆，用miRNA Neasy血清/血浆试剂盒（德国Qiagen公司）按说明书提取RNA并溶解于14 μL DEPC水中，-80 ℃保存备用。……