蒋会婷 郑兰紫 王娅琼 耿利彬 张巍巍 冯宝立

呼吸道病毒感染是儿童急性呼吸道感染最常见的原因［1］，为了解北京市密云区儿童呼吸道传染病的流行动态和呼吸道病毒的感染状况，现对2014年9月－2016年8月患病儿童的咽拭子样本，进行了8种呼吸道病毒的检测，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 样本采集 2014年9月－2016年8月，因呼吸道感染到密云区医院就诊的患儿，包括急性上呼吸道感染病例，肺炎病例及重症肺炎病例，三种类型病例的样本比例为1∶2∶1。病例定义参照北京市呼吸道传染病病原学监测工作方案。每月随机采集10件样本，每周均衡分布，共采集了240件咽拭子样本。

1.2 试剂与材料 呼吸道病毒采样管为友康基业生物科技(北京)有限公司产品。病毒RNA提取试剂罗氏MagNA Pure LC2.0核酸提取试剂盒为Roche公司产品。呼吸道病毒核酸多重联检试剂盒为江苏和创生物科技有限公司产品。

1.3 核酸提取 取50 μL样本，使用罗氏 MagNA Pure LC2.0型全自动核酸提取仪提取病毒RNA，提取物用100 μL洗脱液溶解，立即置－70℃保存备用，操作方法按照仪器使用说明书。

1.4 实时荧光RT-PCR检测 用PCR的方法检测8种常见呼吸道病毒核酸，包括流感病毒(甲型流感病毒、乙型流感病毒)、副流感病毒、腺病毒、冠状病毒、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒、鼻病毒、博卡病毒。按照和创呼吸道病毒核酸多重联检试剂盒说明书进行PCR体系配制。使用Roche 480型实时荧光PCR仪进行荧光PCR扩增，根据试剂盒4组16个检测指标荧光集团信号的设定［2］，进行结果判断。

1.5 统计学方法 用SPSS 19.0软件进行数据分析。所得数据采用χ2检验进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 呼吸道病毒病原谱检出情况 在240份儿童呼吸道感染病例样本中，99份样本检出呼吸道病毒，阳性率为41.25%。其中流感病毒检出阳性率最高为9.58%，其次为副流感病毒和鼻病毒，检出阳性率为7.92%。还出现两种病毒的混合感染共11例。分别出现人偏肺病毒和副流感病毒混合感染1例，鼻病毒和腺病毒混合感染4例，流感病毒和副流感病毒混合感染2例，鼻病毒和副流感病毒混合感染4例(表1)。

表1 2014年9月－2016年8月密云区呼吸道患儿呼吸道病毒病检出情况(n=240)

2.2 不同季节检出情况 对所检测的呼吸道病毒的总体阳性率而言，春季检出阳性率最高，为50.00%，夏季最低，为28.17%。经χ2检验，不同季节阳性检出率有统计学差异(P＜0.05)。其中，流感病毒检出阳性率在冬季(18.33%)和春季(16.67%)较高，副流感病毒检出阳性率在夏季(12.68%)和秋季(14.29%)较高。腺病毒检出阳性率最高的季节是秋季(6.12%)，冠状病毒检出阳性率最高的季节是冬季(3.33%)，呼吸道合胞病毒检出阳性率最高的季节是冬季(13.33%)，人偏肺病毒检出阳性率最高的季节是春季(8.33%)，鼻病毒检出阳性率最高的季节是春季(10.00%)和秋季(14.29%，表2和3)。

表2 儿童呼吸道病毒感染的流行特征

2.3 不同年龄组患儿呼吸道病毒检出阳性率比较依据患儿年龄，分为0～、4～、7～14岁3个年龄组对结果进行统计分析，结果显示0～岁年龄组呼吸道病毒检出阳性率最高，为43.81%，经χ2检验，不同年龄组检出阳性率无统计学意义(P＞0.05，表2)。其中，4～岁组流感病毒检出阳性率最高，为14.08%;0～岁年龄组副流感病毒检出阳性率最高，为9.52%;7～14岁组鼻病毒检出阳性率最高，为7.81%，其中博卡病毒只在0～岁组有检出。

表3 不同季节8种呼吸道病毒检出情况

表4 不同年龄组8种呼吸道病毒检出情况

2.4 不同性别患儿病毒检出情况 男童检出阳性率为34.62%(45/130)，女童检出阳性率为49.09%(54/110)。经χ2检验，性别之间检出阳性率差异有统计学意义(P＜0.05，表2)。

3 讨论

3.1 调查表明，密云区儿童呼吸道病毒检出阳性率与文献报道的北京地区儿童呼吸道病毒检出阳性率基本一致［3］。其中检出阳性率较高的是流感病毒、副流感病毒和鼻病毒，这与石伟先等［3］、荆红波等［4］研究结果一致。

3.2 本研究发现，儿童呼吸道病毒检出存在明显的季节性，秋季和春季是检出阳性率较高的季节，这与北京地区春秋寒冷，气温昼夜温差较大，大气污染有关［5］，李权恒等［6］研究显示，呼吸道病毒阳性率与空气质量指数、PM2.5、NO2和SO2等空气污染物有关。在春季中流感病毒、鼻病毒和人偏肺病毒检出阳性率高，夏季中副流感病毒检出阳性率高，秋季中副流感和鼻病毒检出阳性率高，冬季中流感病毒和呼吸道合胞病毒检出阳性率高，与有关研究结果一致［7－11］。整体趋势是冬春季为儿童呼吸道传染病流行高峰，与既往研究结果一致［11］。对于不同年龄组，呼吸道病毒检出率无差异，这与有关研究结果不一致［12，13］。流感病毒，副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、人偏肺病毒和鼻病毒在各年龄组都有检出，说明各年龄段儿童对呼吸道病毒都易感，因为儿童的抵抗力、免疫力较低，所以应做好儿童呼吸道传染病防病工作。呼吸道病毒检出率与也性别有关，女童较男童易感，这与有关报道不同［13，14］，可能与检测样本数量有限以及本地区的一些未知因素有关，在以后要增加样本量并进行多层面的研究分析。

综上所述，本研究对密云区儿童呼吸道传染病病毒流行特征有一定的认识。但是由于样本量较少，也只检测了病毒类病原，存在一定局限性。此外对于住院患儿也只检测了上呼吸道样本，对病毒的检出势必存在一定影响，今后应该增加对下呼吸道样本的采集和分析。

［1］俞晓燕，吕建新，谭文杰.呼吸道病毒感染核酸检测技术及其应用进展［J］.生物技术通讯，2011，22(5):743－746.

［2］李爱华，张铁钢，石伟先，等.三种呼吸道病毒实验室检测方法比较［J］.中华微生物学和免疫学杂志，2013，33(7):541－544.

［3］石伟先，彭晓旻，韩莉莉，等.北京地区儿童急性上呼吸道感染病毒病原学调查［J］.中国卫生检验杂志，2008，18(7):1263－1265.

［4］荆红波，张爽，王鹏，等.九种呼吸道病毒在北京市顺义地区人群中的流行特征分析［J］.国际病毒学杂志，2015，22(4):240 －244.

［5］陈玲，罗琳华，蔡建兴.儿童呼吸道感染七项常见病毒病原学分析［J］.中国继续医学教育，2016，8(2):50 －51.

［6］李权恒，高文杰，李金英，等.空气污染与儿童急性呼吸道病毒感染的相关性研究［J］.中国全科医学，2016，19(11):1259－1262.

［7］张爱荣，范秋霞，许青霞.2776例儿童急性呼吸道感染病原学检测［J］.中国卫生检验杂志，2016，26(8):1084－1086.

［8］王维，林书祥，李胜英，等.天津地区儿童急性呼吸道感染病毒病原检测分析［J］.天津医药，2012，40(6):625－627.

［9］马广源，凌霞，鲍静，等.2011－2014年无锡地区儿童急性呼吸道病毒感染病原谱研究［J］.中华产染病杂志，2016，34(3):170 －173.

［10］陆敏，曾玫，陆权，等.上海地区小儿急性病毒性下呼吸道感染临床流行病学特征［J］.中国抗感染化疗杂志，2005，5(3):152 －155.

［11］胡兴文，王伟鹏.不同呼吸道病毒在武汉地区儿童中的流行特征分析［J］.检验医学与临床，2014，11(6):770－772.

［12］徐淼玲，陆灶其，梁大立，等.儿童呼吸道感染7种呼吸道病毒抗原检测结果分析［J］.检验医学与临床，2016，13(6):813－815.

［13］朱以军，包云光，王香梅，等.小儿经济积极性系呼吸道病毒感染的临床流行病学特征［J］.国际流行病学传染病学杂志，2015，42(3):170 －173.

［14］钟庆涛，李静媚，陈应坚，等.深圳市龙岗区0～14岁人群流感样病例常见呼吸道病毒监测学分析［J］.中国初级卫生保健，2015，29(3):56 －58.