衍生化LC-MS/MS法测定大鼠血浆中内源性谷胱甘肽的含量
2018-05-04徐鹏遥苏梦翔
中国药科大学学报 2018年2期
关键词:血浆
徐鹏遥,杨 漾,苏梦翔*,狄 斌**
(中国药科大学 1江苏省药物分子设计与成药性优化重点实验室;2蛋白质化学与结构生物学重点实验室;3药物分析系,南京210009)
谷胱甘肽(glutatione)[1]是一种由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸结合且含有巯基的三肽,具有抗氧化及整合解毒的作用。谷胱甘肽不仅作为内源性物质参与生命活动,在临床上也有着广泛应用。主要用于治疗重金属、氟化物等中毒以及辅助治疗肝炎、溶血性疾病、白内障等疾病,其含量水平与机体健康息息相关[2]。
谷胱甘肽体内分析最大的难点在于它的不稳定性,其在血浆中能迅速转化为氧化型谷胱甘肽,增加了样品的测定难度。血浆中谷胱甘肽及氧化型谷胱甘肽的比值是反映机体氧化损伤的重要指标,从20世纪50年代起,研究者就开始建立谷胱甘肽的各种测定方法。目前主要包括荧光光谱法、HPLC法、HPCE法及质谱法等[3-7],其中LC-MS/MS法是现今最常用的测定谷胱甘肽的方法。在已有的文献报道中[8-10],对谷胱甘肽进行直接测定的定量限多在50~200 nmol/L之间,灵敏度和选择性都不能满足生物体内样本分析的要求。对谷胱甘肽进行衍生化能够有效保护半胱氨酸中的残基,避免谷胱甘肽被氧化,使得测定值更加接近实际值。目前利用衍生化法测定谷胱甘肽的定量限多集中在1~100 nmol/L之间[11-13]。但现有的衍生化法存在灵敏度低、前处理复杂、重复性差等问题。随着对谷胱甘肽研究的不断深入,如何解决干扰、快速并准确的测定复杂样品中谷胱甘肽的含量成了研究热点之一。……
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