李泽，孟哲，李宇娜，陶海龙，白中乐，李凌

[郑州大学第一附属医院 心内科（河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室），河南 郑州 450052]

心肌纤维化指在致病因素作用下，细胞外基质（extracellular matrix，ECM）过量沉积，最终导致心脏收缩舒张功能受损的病理性改变[1]。血管紧张素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，Ang Ⅱ）能够诱导活性氧（reactive oxygen species，ROS）的大量生成，导致ROS的生成和清除失衡，进而导致心肌纤维化的发生和进展[2-3]。

丹参酮ⅡA是我国传统中药丹参的重要活性成分。丹参酮ⅡA磺酸钠（sodium tanshinone ⅡA sulfonate，STS）是丹参酮ⅡA经磺化而得到的水溶性药物。研究表明[4-6]，STS具有抗氧化应激、抗纤维化及保护心肌等作用。转录因子NF-E2相关因子 2（nuclear factor erythroid 2-ralated factor 2，Nrf2）和其胞质接头蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Kelch-like ECH-associated protein 1，Keap1）参与调控细胞的抗氧化应激反应。本研究旨在观察STS能否减轻Ang Ⅱ诱导的大鼠心肌纤维化，以及这种抗纤维化的作用是否依赖于Nrf2信号通路，为其应用于临床治疗提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

Ang Ⅱ（美国Sigma-Aldrich公司），Alzet微量渗透泵（美国Durect公司），STS（上海第一生化药业有限公司），细胞核/细胞浆蛋白抽提试剂盒、组织蛋白抽提试剂盒（北京康维世纪生物科技有限公司），Trizol试剂（美国Invitrogen公司），兔抗大鼠Keap1多克隆抗体、小鼠抗大鼠Nrf2单克隆抗体（英国Abcam公司），兔抗大鼠Ⅰ型胶原（Collagen Ⅰ）、Ⅲ型胶原（Collagen Ⅲ）、血红素加氧酶1（HO-1）及醌氧化还原酶1（NQO1）多克隆抗体（武汉博士德生物工程有限公司），兔抗大鼠GCLC多克隆抗体（上海生工生物工程有限公司），实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）Master Mix、SYBR ® Green real time PCR Master Mix（日本Toyobo公司），总谷胱甘肽（total glutathione，GSH）检测试剂盒、总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性及脂质氧化丙二醛（malonaldehyde，MDA）检测试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司）。……