盖子璇　徐宝美

摘 要：[目的]研究不同条件对测定蛋白质浓度过程中影响。[方法]以分子伴侣GroEL为研究对象，利用蛋白质与考马斯亮蓝显色原理， 测定蛋白质含量， 并对测定条件进行优化。[实验结果]：考马斯亮蓝和蛋白的复合物在595nm处有最大吸收，反应2～5min蛋白和染料结合恒定， 20℃孵育测量对实验影响较小，蛋白质含量受SDS干扰。测定所用的标准曲线方为：y=0.0144x+0.0592 。[结论]本文从多方面探究了外界因素对其影响，发现采用考马斯亮蓝测定蛋白质浓度、时间、温度、干扰剂等都是影響实验结果准确性的重要因素。

关键词：考马斯亮蓝法；蛋白质；GroEL；时间；温度；干扰剂

中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2018）04-0000-00

蛋白质是生命体的基本元素 [1-2]。据前人研究，组织和细胞的更新和修补，物质代谢，生理功能的调控以及能量供应都离不开蛋白质[2]。蛋白质正确折叠才能发挥功能，错误折叠就会导致废弃蛋白质不断积累，聚集，引起许多疾病，包括阿尔兹海默症在内的若干种神经退化疾病，对蛋白质进行研究尤为重要 [3]。一般而言，生物体内新生肽链的正确折叠需要分子伴侣的辅助，GroEL便是其中具有重要研究意义的分子伴侣 [4]。

蛋白质定量测定有诸多应用，例如科研研究、临床检验、疾病诊断，准确定量对实验研究至关重要[5-6]。目前，测定蛋白含量常用的方法有紫外吸收法、凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法、考马斯亮蓝法等[7-9]。1976 年 Bradford 发明了考马斯亮蓝法（ G250）[10 -12]。考马斯亮蓝G-250染料和蛋白质结合，通过特征峰测定蛋白含量。……