秦峥幸，王小丽，周楚绮，张　香，任　颖，姚文娟

（南通大学药学院药理系，江苏 226001）

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是心脑血管疾病的主要病理基础，其发病机制极为复杂，包括内皮损伤、慢性炎症反应和氧化应激反应等[1]。内皮损伤是AS斑块形成早期的关键过程，伴随着炎症过程、氧化应激反应以及NO生物活性的下降[2]。肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α，TNF-α）作为主要的炎症细胞因子之一，介导细胞炎症反应、单核细胞-内皮粘附等生物学行为[1]。

Rho特异鸟苷酸解离抑制因子（Rho-specific guanine nucleotide dissociation inhibitors，RhoGDIs）是Rho/ROCK信号通路的中心调节因子。在生理情况下，Rho/ROCK信号传导通路参与调控细胞形态维持、细胞黏附与迁移、细胞增殖与凋亡、基因转录、平滑肌收缩等多种生物学功能，而又同时介导多种心脑血管疾病的发生机制[3-4]。最初认为RhoGDIs是简单的Rho GTP酶抑制因子，但近期研究表明，RhoGDIs控制Rho GTP酶的的稳定、活化和循环[5]。Rho GTP酶具有多样性，在哺乳动物中有三种基因编码的 RhoGDI，分别是 RhoGDI1（又称 RhoGDIα）、RhoGDI2（也称为 RhoGDIβ，Ly-GDI或 D4-GDI）、RhoGDI3（也称为 RhoGDIγ）[5-6]，其中 RhoGDI1 丰度最高、特征最显著，它无所不在地表达，且与多种Rho GTP 酶相互作用，如 RhoA、RhoC、RAC1、RAC2和CDC42[6]。目前对RhoGDI1及其调节的Rho/ROCK信号通路在内皮细胞炎症损伤中的作用还知之甚少。本研究观察RhoGDI1、RhoA、ROCK的表达活化在TNF-α诱导内皮细胞损伤中的作用，以进一步阐明TNF-α引起内皮炎症损伤的机理。

1　材料与方法

1.1药品与仪器重组TNF-α（加拿大Biosource公司，LOT：M092404B5），M199 培养基（美国 Gibco），胎牛血清（Gibco BRL），噻唑蓝（MTT）、二甲亚砜（DMSO）（美国Sigma公司），TUNEL检测试剂盒（碧云天），兔 RhoGDI1、ROCK1、ROCK2、MYPT1、phospho-MYPT1（Thr853）、RhoA 抗体、GAPDH 抗体和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体（CST公司），蛋白质定量标准（Pierce公司），引物、Taq DNA聚合酶和逆转录试剂盒（上海生工生物技术公司），RhoA/Rac1/Cdc42活性检测试剂盒（Cytoskeleton公司）。……