郑树城，王 庆，李莹莹，王英英，曾伟伟，任 燕，石存斌

(1.中国水产科学研究院珠江水产研究所，农业部渔药创制重点实验室，广东省水产动物免疫技术重点实验室，广州 510380；2.上海海洋大学水产与生命学院，上海 201306)

鲤疱疹病毒3型，又称为锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus，KHV)，是引起鲤(CyprinuscarpioLinnaeus )、锦鲤及其变种锦鲤疱疹病毒病(Koi herpesvirus disease，KHVD)的病原，死亡率高达80%以上，对全世界多个国家地区的鲤鱼及锦鲤养殖产业造成了巨大的经济损失[1]。CyHV-3隶属于疱疹病毒目异疱疹病毒科鲤疱疹病毒属，是具有囊膜的双链DNA病毒[2]，病毒颗粒直径为167～200 nm，基因组全长295 kbp，共编码164个开放阅读框(Open reading frame,ORF)，是已知基因组最大的疱疹病毒[3-5]。生物质谱技术鉴定结果表明，CyHV-3含有46个结构蛋白，包括16个囊膜蛋白、3个衣壳蛋白、2个皮层蛋白和25个未知蛋白[6-7]。

虽然质谱鉴定发现CyHV-3可能含有46个蛋白，但对于CyHV-3的免疫原性蛋白的研究却非常有限。其中，ORF81编码的囊膜蛋白是研究较早也是被多数学者广泛认可的主要免疫原性蛋白之一[8]，以ORF81为靶基因设计的DNA疫苗在试验中显示具有较高的免疫保护率[9]。Fuchs等[10]对部分潜在的CyHV-3结构蛋白进行了研究，结果显示囊膜蛋白ORF25、ORF65、ORF148和ORF149具有良好的免疫原性，Zhou等[11]设计的ORF25 DNA疫苗在鱼体试验上也证明了其具有良好的免疫保护效果。最近，Monaghan等[12]利用CyHV-3核衣壳制备的单克隆抗体和质谱基质辅助激光解析离子化-飞行时间质谱(Matrix assisted laser desorption ionization-time of flight，MALDI-TOF/TOF)鉴定到一个具有良好免疫原性的新蛋白ORF84。另外，有研究表明非结构蛋白ORF12可能也具有免疫原性[13]。

本试验采用20%～66%蔗糖密度梯度……