张 林 ，周剑光，吴 涛

(1.中国水产科学研究院长江水产研究所，武汉 430223；2.武汉轻工业大学，武汉 430023)

NADPH氧化酶主要存在于中性粒细胞及其它吞噬细胞的细胞膜上，能够产生活性氧(reactive oxygen species，ROS)，具有杀菌作用，并参与宿主细胞的免疫应答[1]。NADPH氧化酶是一种高度调节的多亚基氧化酶复合体[2]，它的组装与激活需要胞质亚基p47phox、p40phox、p67phox磷酸化与激活，活化的催化亚基p47phox与p40phox转移到胞膜与胞膜亚基gp91phox及p22phox结合并组装成NADPH氧化酶全酶。当有适当外源物刺激时，NADPH氧化酶就被转录激活。其中胞质亚基p47phox、p40phox在激活NADPH氧化酶中发挥着重要的作用[3-6]。

人(Homosapiens)[7]、鼠(Musmusculus)[8]、野牛(Bisonbison)[9]和海豚(Tursiopstruncatus)[10]NADPH氧化酶的5个亚基均已被克隆和描述。鱼类NADPH氧化酶的5个亚基的cDNA也已从红鳍东方鲀(Takifugurubripes)[11]、鲤(Cyprinuscarpio)[12]、翘嘴鳜(Sinipercachuatsi)[13]、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)、大西洋鲑(Salmosalar)、香鱼(Plecoglossusaltivelis)和斑马鱼(Daniorerio)中克隆出来。在NCBI数据库中仅见到大西洋鲑(Salmo salar)的gp91phox、p47phox、p67phox亚基的cDNA全序列的报道。可见对其他鱼类NADPH氧化酶的研究还较少。

草鱼(C.idellus)在我国分布广泛，是非常重要的淡水经济鱼类。然而，疫病是限制草鱼养殖业发展的重要因素之一。鉴于NADPH氧化酶能生成用于清除病原微生物的活性氧，在机体的防御体系中起着非常重要的作用，而迄今还未发现有关草鱼NADPH氧化酶p47phox、p40phox基因的相关报道。本研究克隆了草鱼NADPH氧化酶的2个重要调节亚基p47phox和p40phox基因，并对其编码的氨基酸序列进行了分析，同时对这2个亚基在草鱼不同组织中的差异表达情况检测，以期了解NADPH氧化酶在鱼类免疫调节中的作用及为鱼类疾病爆发的机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验材料

实验用草鱼体重200 g左右，来自中科院水生生物研究所关桥养殖场。……