吴国泰，杜丽东，王瑞琼，王水明，刘峰林，任远

（甘肃中医药大学，甘肃省中药药理与毒理学重点实验室，甘肃兰州 730000）

便秘是临床最常见的复杂的消化道疾病，也是其他疾病的并发症。随着人们饮食结构和生活习惯的变化，便秘的发病率异常升高。便秘后机体会出现腹胀、精神倦怠、体重减轻、不思饮食、面色晦暗、色斑出怒、口臭，食欲减退等诸多病征，给患者带来了极大现、反应迟缓、大便色黑，干燥。同患者也会伴有易的不适和痛苦，严重影响生活质量[1]。西医现有治疗便秘的药物是泻药，近年来，部分便秘患者出现了药物依赖性便秘的现象，便秘的治疗难度明显增加。中药是中国的传统瑰宝，越来越多地用于开发具有保健功能的食品，对临床常见的慢性疾病辅助治疗和康复具有非常重要的意义[2]，本研究按照传统中医理论组方制备当归润肠茶，当归润肠茶由当归、枳壳、干姜、大枣和蜂蜜组成，具有养血温阳、润肠导滞的功能；主治血虚、寒凝、瘀滞之冷秘。本研究采用冰水混合物建立脾胃虚寒型小鼠便秘模型，用甲状腺素和氢化可的松联合建立阴虚血瘀型小鼠便秘模型，用复方地芬诺酯建立慢传输型小鼠便秘模型，从多种病理模型入手，通过研究当归润肠茶对模型小鼠排便时间、排便量、粪便含水量和肠推进率的影响，对当归润肠茶的润肠通便功能进行评价，用最大给药量法评价当归润肠茶的急性毒性，为后续开发提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料与试剂

当归润肠茶，自制（处方：当归3 g、枳壳0.25 g、干姜1 g、大枣4 g、蜂蜜16 g；制法：取当归、枳壳、干姜、大枣（破）处方100倍用量，加10倍量水煎煮1 h，过滤，药渣再加8倍量水煎煮40 min，合并药液浓缩至500 mL，取250 mL药液加蜂蜜800 g，得流浸膏，蒸馏水定容至1000 mL，备用）。

润肠丸，自制（元·《丹溪心法》卷五处方：麻子仁30 g、当归30 g、桃仁30 g、生地黄30 g、枳壳30 g；制法：取处方10倍用量药材，加10倍量水煎煮1 h，过滤，药渣再加8倍量水煎煮40 min，合并药液浓缩至1500 mL，备用）。

氢化可的松注射液，国药集团容生制药有限公司生产，批号 1507281；甲状腺素片，上海长城药业有限公司生产，批号20150103；复方地芬诺酯片，新乡市常乐制药有限责任公司生产，批号 1407025；活性炭粉末，天津市大茂化学试剂厂生产，批号20140106。

实验动物为昆明种小鼠，SPF级，试验开始体重为 18～22 g，雌雄兼用，由甘肃中医药大学实验动物中心提供，合格证号 SCXK（甘）2015-0002-62003800000296。

1.2 主要设备与仪器

HX2001电子天平，由慈溪市天东衡器厂生产；SQP型分析天平，由赛多利斯科学仪（北京）有限公司生产；DHG-9123A电热恒温鼓风干燥箱，由上海齐欣科学仪器有限公司生产。

1.3 实验方法

1.3.1 实验动物的饲养与检疫

饲养管理：实验动物饲养于甘肃中医药大学实验动物中心 SPF级动物房，动物实验设施使用证号SYXK(甘)2015-0005。SPF级饲料(由北京科奥协力饲料有限公司提供)喂养，5只/大箱，群养，自由进食，自由饮水，室温 25±0.5 ℃，相对湿度 55±5%，12 h灯光，12 h黑暗，适应3 d后开始实验。

检疫：对购入动物检疫3 d。期间每日检查动物一次，未发现不健康的动物，全部动物纳入实验。

1.3.2 动物的造模、给药与检测指标

脾胃虚寒型便秘小鼠模型[3]：取60只小鼠，随机抽取10只为正常组，其余50只用活性炭冰水混合物（0～2 ℃）灌胃3 d后随机分为模型组、阳性组，当归润肠茶高、中、低剂量组，共6组。阳性组、当归润肠茶高、中、低剂量组分别灌胃润肠丸(25.0 g生药/kg体重，相当于临床成人日用量的10倍)、当归润肠茶（40.4、20.2、10.1生药/kg体重，分别相当于推荐人用量100倍、50倍和25倍），正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，给药容量为20 mL/kg体重，每天1次，连续3 d。第2 d给药后记录首次排便时间和6 h内排便总重量，第 3 d在药液中加入活性炭（终浓度为10%），灌胃20 min后处死，解剖，测量小肠总长和炭末推进距离，计算肠推进率。

肠推进率=炭末在小肠内的推进距离(cm)/小肠总长度(cm)×100%

阴虚血瘀型便秘小鼠模型[4,5]：取60只小鼠，随机分为6组，设正常组、模型组、阳性组、当归润肠茶高、中、低剂量组，每组10只，除正常组外，其余各组小鼠每天灌胃甲状腺素150 mg/kg和皮下注射氢化可的松2.0 mg/kg，连续7 d。造模第3 d，阳性组、当归润肠茶高、中、低剂量组分别灌胃润肠丸(剂量同上)、当归润肠茶（剂量同上），正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，给药容量为20 mL/kg体重，每天1次，连续7 d。给药第7 d，灌胃60 min后，各组小鼠灌胃10%活性炭1.0 mL/只，单笼饲养，记录各小鼠首次排黑便时间，并记录6 h内排便总粒数，称粪便湿重，80 ℃烘干4 h，称粪便干重，计算粪便含水量，粪便含水量=（粪便湿重-粪便干重）/粪便湿重×100%。给药第8 d，禁食不禁水12 h，各组小鼠灌胃60 min后，各组小鼠灌胃10%活性炭1.0 mL/只，30 min后，处死小鼠，摘自幽门部到回盲部的全部肠管，在光滑桌面铺直，观察肠道形态，测量肠管全长、炭末在肠管内推进距离，计算肠推进率。

肠推进率(%)=炭末推进距离(cm)/肠道总长(cm)×100%

慢传输型便秘小鼠模型[6,7]：取60只小鼠，随机分为6组，设正常组、模型组、阳性组、当归润肠茶高、中、低剂量组，每组10只。阳性组、当归润肠茶高、中、低剂量组分别灌胃润肠丸(剂量同上)、当归润肠茶（剂量同上），正常组和模型组灌胃等量蒸馏水，给药容量为20 mL/kg体重，每天1次，连续7 d。末次给药后各小鼠隔夜禁水不禁食20 h，除正常组外，其余各组小鼠分别灌胃复方地芬诺酯10 mg/kg，正常组灌胃等量蒸馏水，30 min后，各组小鼠给药1次并灌胃10%活性炭1.0 mL/只。立即单笼饲养，记录各小鼠首次排黑便时间，6 h内排便总粒数，称粪便湿重，80 ℃烘干4 h，称粪便干重，计算粪便含水量。处死小鼠，摘自幽门部到回盲部的全部肠管，在光滑桌面铺直，观察肠道形态，测量肠管全长、炭末在肠管内推进距离，计算肠推进率。

肠推进率（%）=炭末推进距离（cm）/肠道总长（cm）×100%

1.3.3 当归润肠茶的急性毒性试验[8]

预实验无法测定当归润肠茶的小鼠经口LD50，另取小鼠40只，雌雄各半，随机分为对照组和受试组，每组20只，禁食不禁水12 h，受试组小鼠按40 mL/kg体重的容量灌胃（10 g当归润肠茶膏溶于20 mL蒸馏水），共2次，间隔6 h，对照组小鼠灌胃等容量蒸馏水。观察各小鼠的饮食、活动、精神状态、皮毛肤色、大小便、体重变化及死亡情况，连续观察14 d，颈椎脱臼处死小鼠，大体解剖，观察肝、肾、肺、脾、心等脏器形态和色泽，并计算小鼠1日最大给药量相当于临床成人日用量的倍数。

1.3.4 数据分析

2 结果与讨论

2.1 当归润肠茶对脾胃虚寒型便秘小鼠的影响

如表1所示，模型小鼠出现竖毛，少动，蜷曲，行动迟缓，被毛干枯、色暗，尿液呈现黄色，大便干硬、排便次数减少，解剖发现结肠内粪便多呈球状或串珠状，质轻干硬。与正常组比较，模型组小鼠排便时间显著延长、排便量和肠推进率显著减小(p<0.01，p<0.05)；与模型组比较，润肠丸组和当归润肠茶高、中剂量组排便时间显著缩短、排便量和肠推进率显著增加（p<0.01，p<0.05），当归润肠茶低剂量组组间差异无统计学意义；结果提示脾胃虚寒型便秘在体质特征方面表现为畏寒肢冷，喜静屈曲，长期导致胃肠动力减弱，引发便秘，当归润肠茶组方中含有干姜、当归等温热性中药，能全面调理机体体征状态，从而改善胃肠功能，促进排便。

表1 当归润肠茶对脾胃虚寒型便秘小鼠排便情况和肠推进率的影响Table 1 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in SSD mice

2.2 当归润肠茶对阴虚血瘀型便秘小鼠影响

如表2所示，实验期间小鼠均未出现死亡现象，与正常组小鼠比较，造模组小鼠精神亢奋，喜动，活动时间长；与正常组比较，模型组小鼠排便时间显著延长、排便量显著减少、粪便含水量显著减少、肠推进率显著减小（p<0.01，p<0.05）；与模型组比较，阳性组、当归润肠茶高、中、低剂量组小鼠排便时间显著缩短（p<0.01），阳性组和当归润肠茶高剂量组排便量、粪便含水量和肠推进率均显著增加（p<0.01，p<0.05），当归润肠茶中、低剂量组组间差异无统计学意义；结果提示阴虚血瘀型便秘表现为津枯肠燥，五心烦热，当归润肠茶能滋阴养血、养阴生津，从而润肠通便。

2.3 当归润肠茶对慢传输型便秘小鼠的影响

如表3所示，正常组小鼠反应灵活，粪便稀软，不成形；模型小鼠出现烦躁不安，排便量减少，大便质硬；当归润肠茶各剂量组和阳性组有所改善；与正常组比较，模型组小鼠首次排黑便时间显著延长、排便量显著减少、便含水量和肠推进率显著降低(p<0.01，p<0.05)；与模型组比较，阳性组、当归润肠茶高、中、低剂量组的首次排黑便时间均显著缩短、排便量显著增多(p<0.01，p<0.05)，当归润肠茶高、低剂量组小鼠粪便含水量均显著增加(p<0.01)，当归润肠茶高、中剂量组的小肠推进率均显著升高(p<0.05)；结果提示，慢传输型便秘以胃肠动力障碍为基本病机，肠动力衰弱导致肠内容物滞留，水分重新收引发肠燥，大便干结，当归润肠茶方中含有蜂蜜、当归等调节胃肠动力兼润下导滞，从而促进排便。

表2 当归润肠茶对阴虚血瘀型便秘小鼠排便情况和肠推进率的影响Table 2 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in YDBS mice

表3 当归润肠茶对慢传输型便秘小鼠排便情况和肠推进率的影响Table 3 Influences of DRT on defecation and peristalic rate of intestinal in GSTC mice

2.4 当归润肠茶的急性毒性

结果显示，按最高浓度最大给药容量灌胃后，各小鼠的饮食、自主活动均未出现异常，皮毛肤色未见异常，体重增加正常，大小便未见异常；持续观察14 d，期间未见动物死亡；颈椎脱臼处死小鼠，大体解剖，肝、肾、肺、脾和心等脏器形态、色泽未见异常。经计算，当归润肠茶小鼠1日最大给药量为40.0 g/kg体重，折合为临床70 kg成人日用量（7 g）的400倍，对小鼠未见明显急性毒性反应，口服安全性较高。

3 结论

研究结果表明润肠茶具有一定的润肠通便作用，可有效缓解脾胃虚寒型便秘、阴虚血瘀型便秘和慢传输型便秘体征，缩短小鼠排便时间，增加排便量，加快肠道推进速度，有润肠通便功能，未见明显急性毒性反应，为当归润肠茶进一步研究和开发奠定了基础。

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