农昌芬 金敏 张兴翔 王敏

宫颈癌（SCC）是常见的妇科恶性肿瘤之一，全世界每年约50万新发病例，占所有妇科癌症的10%，且其发病有年轻化趋势［1-3］。从宫颈上皮内瘤变（CIN）发展为SCC是一个连续的过程，所需时间较长，一般在10～15年。因此，进行高效筛查、早期发现病变、及时明确诊断并进行合理的治疗和随访管理是防治宫颈癌的关键步骤［4-5］。人乳头瘤病毒（HPV）感染与SCC的发病有密切关系。目前，筛查宫颈癌的方法有液基细胞学（TCT）和HPV DNA，TCT特异性高，但阳性率较低，易漏诊；HR-HPV DNA阳性率高，但特异性较低［6-7］。近年来，新的检查技术HR-HPV E6/E7mRNA的应用同时兼顾敏感度和特异度，与病理活检符合程度高，现报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取2014 年1月至2016 年12月因宫颈疾病就诊的患者430 例，年龄21～79 岁，平均年龄（43.0±15.5）岁。所有患者行宫颈 TCT、HR-HPV E6/E7mRNA 、HR-HPV DNA和阴道镜下活检组织病理学检查。

1.2 方法 （1）HR-HPV DNA 检测：标本试管中加入1 ml无菌生理盐水洗脱标本，吸取液体转至1.5 ml离心管中，12000r/min离心5min，弃上清液取沉淀加入50 ml核酸提取液，混匀后2000r/min离心10s，100℃水浴10min，12000r/min离心10min，上清液中加入试剂上机检测。（2）HR-HPV E6/E7 mRNA检测：转移前混匀 Thinprep 细胞保存液瓶，开盖取出1ml至相应的样本转移试剂管中，加入检测试剂，通过靶标捕获、转录介导的等温扩增法（TMA）进行的靶标扩增、通过杂交保护反应（HPA）检测扩增产物（扩增子），检测 14 种高危型别包括 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 和 68 型。

1.3 统计学方法 采用SPSS 14.0统计软件。计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA阳性患者各组间阳性率比较 CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和SCC组HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA阳性率均显著高于炎症组，CINⅡ、CINⅢ和SCC阳性率显著高于CINⅠ（P＜0.05）；炎症组HR-HPV DNA阳性率显著高于 HR-HPV E6/E7 mRNA（P＜0.05）（见表 1）。

表1 HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA阳性患者病理活检结果［n（%）］

2.2 HR-HPV E6/E7 mRNA和HR-HPV DNA敏 感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和约登指数比较 HR-HPV E6/E7 mRNA特异度和阳性预测值显著高于HR-HPV DNA（P＜0.05）见表2。

表2 HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA对宫颈病变诊断评价

2.3 HR-HPV E6/E7 mRNA、TCT单独和联合检测的意义 联合检测阳性检出率显著高于单独检测（P＜0.05）见表 3。

表3 单独使用HPV E6/E7 mRNA、TCT检测与联合检测的比较

3 讨论

宫颈癌是所有癌症中目前唯一明确病因的癌症，其主要原因为HPV的持续感染［8］。但大部分女性感染HPV病毒后通过自身免疫调节功能将其清除，且HPV感染至发生癌前病变和颈宫癌是一个漫长的过程，仅极少部分HR-HPV感染会引起宫颈病变［9-11］。

E6蛋白含151个氨基酸，与抑癌基因p53蛋白和细胞内的E6相关蛋白（E6AP）结合，导致突变增加、DNA的完整性受损；E7癌基因在宫颈癌发生中主要起转化作用，E6、E7联合作用可使有丝分裂纺锤体形成缺陷和中心体数目异常，导致染色体异常基因不完整以及多倍体细胞的出现，促使细胞恶变和肿瘤的发生［12-14］。Johansson H［15］等对 HR-HPV DNA 阳性，TCT为无明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）或低度鳞状细胞上皮内病变（LSIL）的患者进行4-5年的随访后发现，ASCUS患者HPV E6/E7 mRNA表达率90.0%，LSIL患者为95.4%，HPV E6/E7 mRNA阴性妇女进展为CINⅡ～Ⅲ的风险低。Duvlis S等［16］通过对413例妇女的HPV E6/E7 mRNA、HPV DNA和细胞病理学进行检测，发现CINⅡ+妇女，HPV E6/E7 mRNA的特异性和阳性预测值均明显高于HPV DNA。

本资料结果显示，HR-HPV DNA总阳性率为49.30%，HR-HPV E6/E7 mRNA总阳性率为33.49%。随着病理级别的升高，HR-HPV E6/E7mRNA 和HRHPV DNA阳性率均呈现趋势性升高，CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ 和 SCC组HR-HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA阳性率均显著高于炎症组，CINⅡ、CINⅢ和SCC阳性率显著高于CINⅠ（P＜0.05），但CINⅡ+组间阳性率差异无统计学意义（P＞0.05）。从相同组患者比较HR-HPV E6/E7 mRNA和HR-HPV DNA阳性检出率，只有炎症组HR-HPV DNA阳性率显著高于HR-HPV E6/E7 mRNA（P＜0.05），CINⅠ+组HRHPV DNA和HR-HPV E6/E7 mRNA阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。HR-HPV E6/E7 mRNA 和 HRHPV DNA敏感度分别为66.67%和73.81%，阴性预测值分别为80.42%和79.82%，两者对宫颈病变诊断差异无统计学意义（P＞0.05）；特异度分别为87.79%和66.41%，阳性预测值分别为77.78%和58.49%，对宫颈病变诊断差异有统计学意义（P＜0.05）。HR-HPV E6/E7 mRNA单独检测阳性率为66.67%，TCT单独检测阳性率为79.76%，两者联合检测则达到90.48%，联合检测阳性检出率显著高于单独检测（P＜0.05）。

总之，HR-HPV DNA检测对宫颈病变的风险预测过早，而HR-HPV E6/E7 mRNA的表达是导致宫颈细胞恶性转化并发展至宫颈癌的必要过程，相对于HRHPV DNA检测，HR-HPV E6/E7 mRNA检测能够更精确预测细胞向高度病变和癌症转变的可能性。HRHPV E6/E7 mRNA和TCT联合检测能提高阳性检出率，防止漏诊。

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