肖奕 马大昌 王红磊 吉琨 武力

[摘要] 目的 基于ATP7A探讨粉防己碱对乳腺癌细胞顺铂耐药的逆转作用及机制。 方法 建立两种人乳腺癌顺铂耐药细胞株及ATP7A高表达细胞。检测粉防己碱对顺铂耐药细胞的逆转作用，高效液相色谱测定胞内顺铂含量，检测ATP7A蛋白表达。 结果 耐药乳腺癌细胞的顺铂敏感性显著降低（P < 0.05），ATP7A表达升高（P < 0.05），胞内顺铂含量明显降低（P < 0.05）；ATP7A高表达细胞较正常乳腺癌细胞顺铂敏感性下降（P < 0.05），胞内顺铂含量降低（P < 0.05）。而粉防己碱对细胞耐药性具有明显的逆转作用，较耐药细胞及转染细胞可升高胞中顺铂含量（P < 0.05），降低ATP7A表达（P < 0.05）。 结论 粉防己碱对人乳腺癌顺铂耐药细胞及ATP高表达细胞的顺铂耐药性有逆转作用，其机制可能与抑制ATP7A表达相关。

[关键词] 粉防己碱；乳腺癌；顺铂耐药；ATP7A

[中图分类号] R737.9 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）12（a）-0018-05

顺铂是乳腺癌化疗一线用药，但耐药严重影响临床疗效[1-2]。ATP7A参与肿瘤对顺铂的泵出，耐药乳腺癌细胞中表达明显增高[3-4]。粉防己碱对肿瘤耐药具有逆转作用[5-7]，可提高阿霉素在人口腔上皮癌耐药细胞中的浓度；与苦参碱联用可有效提高多柔比星对乳腺癌的细胞毒性[8-9]，但对其在乳腺癌顺铂耐药中的作用有待探究。本研究采用两种人乳腺癌细胞株建立顺铂耐药细胞及ATP7A高表达乳腺癌细胞，考察粉防己碱对不同顺铂耐药细胞的影响及作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MCF-7购自中国科学院上海细胞库；RPMI1640培养基、胎牛血清（Gibco，美国）；粉防己碱、顺铂、DMSO（Sigma公司，美国）；BCA蛋白测定试剂盒（碧云天生物研究所，中国）；LipofectamineTM2000（Invivogen，法国）；pCMV6/ATP7A转染试剂（上海吉玛生物公司，中国）；ATP7A、GAPDH（abcam，英国）；其他试剂均为国产分析纯。

1.2 顺铂耐药MDA-MB-231、MCF-7细胞的建立

取对数生长期MDA-MB-231、MCF-7细胞，加入终浓度为100 ng/mL的顺铂，培养，传代；当细胞适应后，适当增加顺铂浓度（30～50 ng/mL），保证细胞可稳定生存、传代，6周后得到稳定耐药细胞株MDA-MB-231/DDP、MCF-7/DDP，停用顺铂培养2周后取处于对数生长期的细胞进行后续实验[10]。……