韩晓群，林剑国，杨婧

肝纤维化是因胶原纤维生成和溶解失衡造成的大量细胞外基质蛋白沉积在肝脏内形成瘢痕组织的过程。肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)是肝纤维化的主要效应细胞，其活化是肝纤维化发生发展过程中的一个重要事件。姜黄素是从姜黄根茎中提取的一种活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等功能，并具有抗纤维化作用，目前对HSCs机制的研究主要集中在抑制HSCs增殖、诱导HSCs凋亡等方面[1-3]。本研究聚焦于姜黄素能否通过调节HSCs脂质水平抑制HSCs活化，从而发挥其抗纤维化作用机制，希望通过探讨姜黄素对活化HSCs脂质水平的影响及其可能机制，为临床抗纤维化治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 姜黄素、油红O染色试剂盒、TRI试剂购自美国Sigma公司；甘油三酯(triglyceride，TG)和游离脂肪酸(free fatty acid，FFA)ELISA试剂盒购于中生北控生物科技有限公司；高效RNA-cDNA 试剂盒购于美国Applied Biosystems公司；2×SYBR Green Real-time PCR Master Mix购于上海欣百诺公司。

1.2 小鼠HSCs的分离、鉴定、培养及药物干预C57/B6小鼠购于武汉大学实验动物中心。向小鼠门静脉灌注链霉蛋白酶和胶原酶，采用梯度离心法分离HSCs。将分离所得HSCs以含20%胎牛血清(FBS)的DMEM悬浮，台盼蓝法计算细胞数及存活率。在倒置显微镜下观察，新分离的HSCs在培养液中悬浮，呈球形，折光性强。荧光显微镜下观察，新分离的HSCs在328nm紫外光激发下发出蓝绿色的自发荧光。细胞以1×106/cm2密度接种于6孔培养板，48h后纯度大于95%；3d后以含10% FBS的DMEM常规传代培养。取第4～9代细胞用于实验。同时常规培养小鼠肝细胞AML12，作为对照。实验前以不含FBS的DMEM培养HSCs或AML12细胞24h后，再采用凋亡抑制因子存活素(survivin，1nmol/L)预处理细胞24h，之后分别以浓度为5、10、20μmol/L姜黄素干预细胞24h。……