大兴安岭野生蜜环菌人工驯化种植初探

2018-02-01李贵春许延敏庞启亮梁秀凤胡海冰李宏涛刘昕哲

食药用菌 2018年4期

李贵春许延敏庞启亮梁秀凤胡海冰李宏涛刘柱刘昕哲

大兴安岭野生蜜环菌人工驯化种植初探

李贵春许延敏庞启亮梁秀凤胡海冰李宏涛刘柱刘昕哲

（大兴安岭地区农业林业科学研究院，黑龙江大兴安岭 165000）

采集黑龙江省大兴安岭加格达奇区蜜环菌菌株多个，利用PDA培养基分离、纯化获得优良菌株Ar1603和Ar1604-2，制作三级菌袋，在大棚内进行人工驯化种植，实现当年出菇，Ar1603平均产量为2.84 kg/m2，Ar1604-2平均产量为3.42 kg/m2。

大兴安岭；野生蜜环菌；分类；分布；人工驯化种植

蜜环菌（）是一种兼性寄生于多种木本、草本植物的食用菌，广泛分布于亚洲、欧洲、北美洲等温带地区，中国的河北、山西、黑龙江、吉林、浙江、福建、广西、陕西、四川、云南、贵州、西藏等省（自治区）也有分布[1]。大兴安岭地区在夏秋季节大量发生。蜜环菌隶属于担子菌纲、伞菌目、白蘑科（），又名榛蘑[2]，具有很高的食用价值。由于每年气温及降雨时期的不同，野生蜜环菌产量呈现周期性大幅度波动[3]。

1 蜜环菌分类

蜜环菌最先是1766年丹麦植物学家Martin Vahl以种名在《Flora Danica》上发表，当时仅有一个漂亮的图和简短的描述。1819年瑞典植物学家Elias Fries在属中建立一个新族。从Fries到现在的200年间，基于形态学的蜜环菌属的分类一直比较混乱，蜜环菌属所包括的种类和数量，一直是争论的焦点之一[4]。

自1973年，Hintikk发现蜜环菌的四极性性别系统，借助于交配测试的帮助，研究该属的互交不育性成为可能。利用互交不育群即生物种（每一个互交不育群为一个生物种）的研究，对蜜环菌进行鉴定。交配测试表明，依据子实体形态鉴定为蜜环菌的菌株中存在着许多互交不育群（生物种）。说明蜜环菌是一个由多个生物种组成的复合种。我国对蜜环菌分类始于20世纪90年代，利用交配测试方法，经秦国夫[4]、孙立夫[5]、贺伟[2]等的研究，先后发现14个蜜环菌生物种，其中东北地区常见有5个生物种，即芥黄蜜环菌（），高卢蜜环菌（），奥氏蜜环菌（），黄盖蜜环菌（）和中国生物种F（CBS F）。是在黑龙江省境内分布范围最广、出现频率最高的一个生物种；其次是CBS F，在小兴安岭和黑龙江东部的完达山脉有分布；则局限于大兴安岭和小兴安岭地区，出现的频率不高；而和则出现于小兴安岭的伊春林区[5, 6]。

2 蜜环菌在大兴安岭的分布

2.1 地域分布趋势

蜜环菌是黑龙江省一种重要的食用真菌，在黑龙江省大兴安岭地区分布呈现地域差异，于本区东部和南部，即在加格达奇区、松岭区、呼玛县等地分布较多，新林区、塔河县两地多分布于南部及东部，呼中区偶见分布，漠河县未见分布。

2.2 时间分布趋势

大兴安岭地区，因每年气温变化和降水的不同，蜜环菌出菇期大致分为两个高峰，如加格达奇区第一个出菇高峰期在7月20日至8月10日，第二个高峰期在8月20日至9月25日。2016年至2017年在两个不同区域（相距30 km）的同一地块分别采样，2016年采集到大量蜜环菌，而2017年则仅采集到零星几个蜜环菌子实体。说明野生蜜环菌的发生不具连续性。

3 蜜环菌人工驯化种植

3.1 母种获得

分别于2016年9月6日和9月10日在距加格达奇区市中心向北、向南各13公里区域采集到野生蜜环菌子实体，选择个体较大、质地饱满肥厚、尚未开伞、无病虫危害的幼菇，按照采集先后顺序暂定名为Ar1601、Ar1602、Ar1603和Ar1604-1、Ar1604-2。

采用组织分离的方法获得纯菌种。将种菇带回接种室后，在超净工作台内用75%酒精棉擦净子实体表面，然后用手术刀将子实体纵剖成两半,在菌盖与菌柄交界处切取0.3～0.5×0.3～0.5（cm）大小的组织，置于PDA培养基中，于25 ℃恒温箱中培养，所得到的菌株为F0代。

3.2 优势菌株选择与纯化

（1）培养基配方。采用PDA培养基，以马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、磷酸二氢钾3 g、硫酸镁1.5 g配制。

（2）优势菌株选择与纯化。对蜜环菌分离后的优势菌株选择，主要视其分离后子实体组织萌发速度和菌索的发生势进行优胜劣汰。选择其中分离组织生长势强的进行转管。转管时切取长势旺盛、幼嫩的菌索（长0.2～0.3 cm）转接到培养基表面，获得F1代菌种，并将其置于23～25 ℃恒温箱中培养。当长出新菌索后，再次选择菌索生长健壮的试管种进行转管，获得的F2代菌种继续培养至菌索长满试管保存备用。经过上述选择与纯化，获得表现优良的菌株Ar1603和Ar1604-2。

3.3 原种制作

于2016年12月26日制作原种，培养基配方为阔叶木屑77%、麸皮20%、蔗糖2%、石膏粉1%，含水量62%～65%，pH自然。

在无菌条件下，将母种F2代转接于原种培养基中扩大繁殖，每支母种试管转接5袋原种。然后置于25 ℃条件下避光培养，约30天长满全袋。

3.4 栽培种制作

于2017年3月2日制作栽培种，培养基配方为阔叶木屑78%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏粉1%，含水量63%～65%，pH自然。每袋原种转接40～50袋栽培种，置于温度20～25 ℃、湿度30%～40%培菌室内培养，定期检查菌袋生长情况并进行通风管理，防止培养室温度过高过低、湿度过大或通风不良。

3.5 出菇栽培试验

于2017年5月24日至8月20日，在大棚内进行驯化种植。采用半脱袋立式划口地栽模式。具体方法是做长2 m、宽1.2 m的畦床，床土为普通草甸土，厚15 cm；将栽培种菌袋接种口一侧脱袋14 cm，埋于地下，地上部分为6～7 cm，划4个V形口。袋间距为15 cm，每平方米摆16袋。床上和袋上覆3 cm厚干树叶。

温度管理：棚内前期扣大棚膜，温度保持在15～28 ℃，6月10日以后扣6针遮阳网，温度控制在26 ℃以下。

湿度管理：从5月26日开始，每天向棚内的栽培床浇水2～3次，每次30 min，使土壤含水量达95%以上。6月16日以后，棚内每天早晚各浇水20 min，保证栽培床内土壤湿度90%左右，夜间空气湿度达85%以上。

光照管理：6月2日在畦床上覆盖草帘遮阴、降温。6月16日将草帘撤去，换成2层遮阳网。8月初，菇蕾形成期揭去畦上遮阳网，保留大棚上的遮阳网。

3.6 不同菌株的产量与子实体形态

自8月10日开始有原基形成，并很快出菇，8月15日子实体长至九分熟时采收。产量采用随机调查方式，每个菌株调查3组，每组调查1 m2内所采收的子实体鲜重，并观察记录子实体形态。结果为：Ar1603平均产量为每平方米2.84 kg，子实体较小，丛生，菌盖直径3～5 cm，有鳞片，褐色，有菌环；菌柄上部白色，根部褐色。Ar1604-2平均产量为每平方米3.42 kg，子实体菌盖直径4～6 cm，淡黄色，中部有鳞片状小斑点；菌褶延生、稍密、不等长，菌环初期有膜质，后期变薄；菌柄细长圆柱形，褐色，根部色深。