卢坚+孙家麒

摘要 通过单因素实验建立1种乙醇提取银杏雄球花黄酮的方法。采用有机试剂乙醇浸提得银杏雄球花乙醇提取物，测定其总黄酮含量，并对影响银杏雄球花总黄酮提取的乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间、提取次数5个因素进行单因素试验，优化提取条件。结果表明，在乙醇浓度80%、液料比1∶10、温度50℃、提取时间30min、提取2次时，黄酮得率较高，为1.8%。

关键词 银杏；雄球花；黄酮；提取；测定

中图分类号 TS201.2 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2017）24-0241-02

Extraction and Determination of Flavonoids from Male Cones of Ginkgo biloba L.

LU Jian 1 SUN Jia-qi 2

（1 Chengdu Yulin High School，Chengdu Sichuan 611130； 2 College of Agronomy，Sichuan Agriculture University）

Abstract A method of ethanol extraction of flavonoids from male cones of Ginkgo biloba L.was established by single factor experiment.The ethanol extract of male cones of Ginkgo biloba L.was extracted with organic reagent ethanol to determine the content of total flavonoids.The concentration of ethanol，the ratio of liquid to material，the extraction temperature，the extraction time and the number of extraction were determined.The extraction conditions were optimized.The results showed that when the concentration of ethanol was 80%，the ratio of liquid to material was 1∶10，the temperature was 50 ℃，the extraction time was 30 min and the extraction time was twice，the yield of flavone was 1.8%.

Key words Ginkgo biloba L.；male cone；flavonoids；extraction；determination

銀杏（Ginkgo biloba L.）是我国较常见的观赏树种，栽种范围广，属银杏科、银杏属的落叶乔木[1]。目前已有较多关于银杏果实和叶的研究[2-3]，果实含多种营养物质，是极佳的滋补品，味美养生。而对银杏叶的研究发现其含有各种生物活性成分，如酚酸、黄酮类和萜类等[4-6]。正因如此，银杏叶便有了不同的生物学功能。银杏树每年春季开花，在这期间会有不少的银杏雄球花从树上掉落，作为银杏树的一部分却被废弃，造成资源浪费。因此，试验将以银杏雄球花为材料，从植物中常含有的生物代谢产物黄酮着手，研究银杏雄球花黄酮的提取及含量，以期为银杏雄球花这一资源的利用做相关基础研究。本研究以乙醇为浸提液，以黄酮得率为考察指标，通过单因素试验，初步建立一种乙醇提取银杏雄球花黄酮的方法。

1 材料与方法

1.1 试材与仪器

供试材料为银杏雄球花，4月采自四川农业大学校园内。

主要试剂为芦丁（美国Sigma-Aldrich公司）；乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠等，均为国产分析纯。

主要仪器有FW-100型高速粉碎机（北京市永光明医疗仪器厂）、DK-8D型三孔电热恒温水槽（上海齐欣科学仪器有限公司）、SC-04型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）、1800/1600 UV系列紫外可见分光光度计（翱艺仪器（上海）有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 银杏雄球花黄酮的提取和测定。具体包括以下内容。

（1）样品处理。将采集的银杏雄球花在105 ℃下烘10 min，随后再以60 ℃烘至恒重，粉碎，过筛，得到银杏雄球花干粉。

（2）芦丁标准曲线的制作。芦丁标准溶液为100 μg/mL。参考文献[7]方法，取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL分别置于10 mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.3 mL摇匀，静置6 min，加入10%硝酸铝0.3 mL，摇匀，静置6 min，再加入4%NaOH 4.0 mL，用60%乙醇定容至10 mL。测定A510值，并绘制标准曲线。

（3）样品总黄酮提取及含量的测定。称取样品2.0 g，按60 ℃、料液比1∶10加入60%乙醇溶液，浸提30 min，6 000 r/min离心，收集上清液，定容至50 mL，得到40 mg/mL（w/v）的银杏雄球花乙醇提取液。量取一定浓度的银杏雄球花乙醇提取液，按上述芦丁测定方法检测吸光值A510，由芦丁标准曲线求得的回归方程推算银杏雄球花中的黄酮含量。

1.2.2 影响银杏雄球花黄酮得率的单因素试验。具体有以下内容。

（1）乙醇浓度。设置乙醇浓度为50%、60%、70%、80%、90%，分别称取银杏雄球花干粉2.0 g，加入不同浓度乙醇溶液10 mL（即料液比为1∶10），60 ℃水浴，每30 min摇晃1次，提取2 h，6 000 r/min离心10 min，取上清液，并定容至50 mL，测定提取液黄酮含量。endprint

（2）料液比。称取银杏雄球花干粉2.0 g，按不同的料液比加入80%乙醇，其他提取条件不变，提取2 h，同样方法离心，定容，测定提取液黄酮含量。

（3）提取温度。以上述方法改变提取温度，固定其他条件，考察温度对银杏雄球花黄酮得率的影响。

（4）提取时间。同理固定其他条件，改变提取时间，测定不同提取时间下黄酮得率。

（5）提取次数。在其他条件不变的情况下，料液比按1∶10进行浸提，分别收集第1次以及逐次将沉淀再按料液比1∶10浸提后的上清液，进而测定不同提取次数的黄酮得率。

2 结果与分析

2.1 芦丁标准曲线

以芦丁作为标准品，按相关文献方法，以芦丁浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制芦丁标准曲线（图1），得回归方程：y=0.001 6x-0.006，R2=0.999 5。通过一定浓度的银杏雄球花乙醇提取液在类似方法下测定，计算银杏雄球花总黄酮含量为1.8%。

2.2 影响银杏雄球花黄酮提取的单因素试验

2.2.1 乙醇浓度。在其他因素不变的情况下，乙醇浓度为变量，测定乙醇浓度对银杏雄球花黄酮得率的影响，结果见图 2。乙醇浓度对黄酮得率有明显的影响，随着乙醇浓度的改变，黄酮得率发生变化，乙醇浓度在30%～80%之间时，黄酮得率随乙醇浓度升高而加大，继续增加乙醇浓度黄酮得率则下降。可以看出，在乙醇浓度为80%时，黄酮得率最高。

2.2.2 料液比。设置不同的料液比，考察料液比改变对银杏雄球花黄酮得率的影响，结果见图3。可以看出，料液比的改变对黄酮得率有显著的影响，当料液比为1.0∶2.5、1∶5、1∶10 時，黄酮得率相差不大，但料液比为1∶15～25时黄酮得率则表现为明显的下降趋势，在测定范围内，料液比为1∶10时，黄酮得率最大。

2.2.3 提取温度。以提取温度为变量，其他因素固定不变，考察提取温度对银杏雄球花黄酮得率的影响，结果见图4。可以看出，提取温度的改变对黄酮得率有影响，但影响不大，在测定范围内，当提取温度为50℃，黄酮得率最大。

2.2.4 提取时间。改变提取时间，其他条件不变，检测提取时间对银杏雄球花黄酮得率的影响，试验结果见图5。可以看出，提取时间对黄酮得率的影响较小。

2.2.5 提取次数。以提取次数为变量，固定其他条件，将银杏雄球花干粉经首次浸提，离心，定容，测定黄酮含量，记为第1次，再将沉淀按相同方法浸提，记为第2次，以此类推。测定结果见图6。结果表明，随着提取次数的增多，黄酮得率迅

速降低，提取到第3次时黄酮得率极低。

2.3 银杏雄球花黄酮含量

根据试验分析结果，选择试验范围内银杏雄球花黄酮的最适宜条件，即称取银杏雄球花干粉2 g，料液比1∶10，乙醇浓度80%，温度50 ℃，浸提30 min，以6 000 r/min离心10 min，取上清液，再往沉淀加入80%乙醇20 mL，按前述方法重复浸提1次。收集并合并2次上清液定容至50 mL，测定银杏雄球花黄酮含量，经推算，银杏雄球花黄酮含量为1.8%。

3 讨论

银杏雄球花作为银杏树的一部分，每年春季开花期间会有部分自然脱落，由于现今银杏树栽种数量多，而这些掉下的银杏雄球花却不被利用。因此，本试验以银杏雄球花为材料，尝试测定本植物材料中的生物活性成分黄酮的含量，并进一步探索用有机试剂乙醇提取的适宜条件，以黄酮得率为指标，考察了乙醇浓度、料液比、提取温度、提取时间和提取次数5个因素对银杏雄球花黄酮提取的影响。由试验结果分析可知，除提取时间外，乙醇浓度、料液比、提取温度和提取次数对提取的黄酮得率均有影响，但影响程度不一样。其中乙醇浓度、料液比和提取次数的影响较大，表现出较强的相关性，最终分析确定该方法以乙醇浓度80%、料液比1∶10，提取温度50 ℃、提取时间30 min和提取2次为宜，在此基础上测得银杏雄球花黄酮含量为1.8%。研究结果揭示，银杏雄球花可通过乙醇在一定条件下浸提获得生物活性成分黄酮，这对银杏雄球花的开发利用具有重要意义。

4 参考文献

[1] 曹福亮.中国银杏[M].南京：江苏科学技术出版社，2002.

[2] 杨强，李新华，王琳，等.银杏果多糖的物化性质及抗氧化活性研究[J].现代食品科技，2013（10）：2395-2400.

[3] 汪素娟，康安，狄留庆，等.银杏叶提取物主要活性成分药动学研究进展[J].中草药，2013（5）：626-631.

[4] 刘平平，潘苏华.银杏叶制剂中银杏酚酸研究进展[J].中国中药杂，2012（3）：274-277.

[5] 唐于平，楼凤昌，王景华，等.银杏叶中黄酮类成分的研究[J].中国药学杂志，2001（4）：15-17.

[6] 刘彬果，张新萍，刘岩.银杏叶中萜内酯类化合物的研究进展[J].药学实践杂志，2011（6）：421-425.

[7] 陈志红，徐美奕.香菜乙醇提取液的体外抗氧化活性[J].食品研究与开发，2009，30（11）：69-71.endprint