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不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响

2016-12-27胡冬梅朱丽佳

科学与财富 2016年29期
关键词:测定何首乌炮制

胡冬梅+朱丽佳

摘 要:本文对不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响进行研究。固定相为:依利特hypersil BDS C18 色谱柱(4.6*250*5u),乙腈-甲醇-水(10:2:88)为流动相,检测波长为322nm;2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在5~95μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。本法简便、重现性好、回收率高,可用于不同何首乌炮制品中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定。

关键词:何首乌;炮制;测定

何首乌为蓼科多年生缠绕藤本植物,又名野苗、桃柳藤、赤葛、九真藤、马肝石、九真藤芮草、蛇草、陈知白、、疮帚等。生首乌能解毒,消痈,润肠通便。制首乌功能补肝肾,益精血,乌须发,强筋骨。《滇南本草》记载:“涩精,坚肾气,止赤白便浊,缩小便,入血分,消痰毒。治赤白癜风,疮疥顽癣,皮肤瘙庠。截疟,治痰疟。”何首乌经炮制可减毒,炮制方法、时间对何首乌成分及肝毒性均有影响[1-5]。本文对不同炮制工艺对何首乌中成分含量的影响进行研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器:PURIST超纯水系统(上海瑞枫生物科技有限公司);TGF-9075A电热恒温鼓风干燥箱(上海喆图科学仪器有限公司);HX-06超声波清洗器(武汉恒信世纪科技有限公司);德国美诺PG8583CD实验室清洗消毒机(科德恩(北京)科技发展有限公司);LC2000液相色谱(天美(中国)科学仪器有限公司);普利赛斯EP125SM电子天平(上海天美天平仪器有限公司);PURELAB flex 系列纯水机(威立雅水处理技术(上海)有限公司)。

1.2 试药:乙腈(北京迈瑞达科技有限公司)、磷酸(天津谱祥科技有限公司)、三乙胺(淄博市临淄冰清精细化工厂)、甲醇(天津谱祥科技有限公司)、磷酸氢二铵(北京迈瑞达科技有限公司)、冰乙酸(北京迈瑞达科技有限公司)。

2 含量测定

2.1 色谱条件

依据查阅文献及考查的结果,确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为依利特hypersil BDS C18 色谱柱(4.6*250*5u);乙腈-甲醇-水(10:2:88)为流动相;检测波长为322nm;流速1.0mL·min-1;柱温:30℃。理论板数按2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰计算应不得低于2000。

2.2 炮制品的制备

2.2.1 黑豆黄酒制。取何首乌倒入盆内,用黑豆汁与黄酒拌匀,置罐内或适宜容器内,密闭,坐水锅中,隔水炖至汁液吸尽,取出,晒干即得。黑豆汁的制法 取黑豆10kg,加水煮约4小时,熬汁约15kg,豆渣冉加水煮约3小时,熬汁约10kg,两次共熬汁约25kg。

2.2.2 蒸制。取何首乌,洗净,煮沸4-6小时,至中心至粘性,晒半干,切去茎基及尾梢,反复晒至发硬,再浸4小时后,加水盖过药面,煮沸8小时,焖1夜,晒半干,再蒸8小时,焖15小时。再如前法操作1次,趁热切9-12mm方块,晒干。

2.2.3 酒制。取何首乌片或块,用黄酒拌匀,润4-6小时,放笼屉内蒸6小时,取出稍晾,再加入锅内汁水,候汁吸尽,捞起再蒸,以蒸黑为度,取出晒干或烘干。

2.2.4 黑豆制。取何首乌片或块,用黑豆汁拌匀,置非铁质的适宜容器内,密闭,隔水加热或用蒸汽加热炖至汁液吸尽或取何首乌片或块。黑豆汁制法:取黑豆10kg,加水适量,约煮4小时,熬汁约15kg,豆渣再加水煮约3小时,敖汁约10kg,合并得黑豆汁约25kg。

2.3 供试品溶液的制备

取何首乌适量,粉碎成粗粉,精密称定至容量瓶内,加适量流动相超声20分钟,放凉,用流动相定容,过0.45μm的滤膜,即得。

2.4 对照品溶液的制备

精密称取2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品约10mg,置50毫升棕色容量瓶中,用流动相超声波振荡溶解并用水稀释至刻度,摇匀,精密吸取10毫升,置100毫升棕色容量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL溶液中含2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷20μg)。

2.5 标准曲线的制备

制备浓度为5μg·mL-1、15μg·mL-1、25μg·mL-1、35μg·mL-1、45μg·mL-1、55μg·mL-1、65μg·mL-1、75μg·mL-1、85μg·mL-1、95μg·mL-1的对照品溶液,分别精密吸取10μL注入HPLC,记录色谱图。以峰面积积分值A(μg)为横坐标,进样量为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。试验表明,2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品在5~95μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

精密吸取2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液10μL重复进样6次,测定峰面积积分值,对照品峰面积积分值的RSD为0.55%。结果表明,本实验精密度良好。

2.7 重现性试验

分别称取同批何首乌样品6份,分别制备成供试品,按色谱条件测定含量,并计算样品的RSD值为0.53%,结果表明,此含量测定方法的重现性良好。

2.8 稳定性试验

取供试品溶液,分别在0,1,2,3,4h精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪,进样测定,供试品2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷峰面积积分值的RSD为0.52%。结果表明2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷至少在4h内稳定。

2.9 样品含量测定

依照上述含量测定方法,测定何首乌三批样品中2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷的含量,结果2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量生片>黑豆制>黑豆黄酒制>蒸制>酒制。

3 讨论

分别考察乙腈-甲醇-水(10:2:88),乙腈-甲醇-水(20:2:78),乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾(含0.5%三乙胺,用磷酸调节pH至3.0)(30:70),乙腈-甲醇-水(15:15∶70),0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH到3.0)-乙腈(20∶80),乙腈-甲醇-1%醋酸钠-冰醋酸(18:12:70∶0.1)不同比例的流动相,结果以乙腈-甲醇-水(10:2:88)为流动相,供试品各峰分离效果最好,故选用乙腈-甲醇-水(10:2:88)为流动相。2,3,5,4′-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷含量生片>黑豆制>黑豆黄酒制>蒸制>酒制。

参考文献

[1]李晓菲,李娜,涂灿,李春雨,庞晶瑶,贾歌刘畅,赵艳玲,牛明,马致洁,王伽伯,孙洪胜,肖小河.基于内毒素特异质模型的生首乌与制首乌肝毒性比较研究[J].中草药,2015(10).

[2]贾歌刘畅,庞晶瑶,柏兆方,牛明,赵艳玲,朱云,张雅铭,马致洁,赵奎君,王伽伯,肖小河.何首乌及其成分对人正常肝细胞凋亡的影响[J].中国中医药信息杂志,2015(11).

[3]涂灿,蒋冰倩,赵艳玲,李春雨,李娜,李晓菲,贾歌刘畅,庞晶瑶,马致洁,王伽伯,肖小河.何首乌炮制前后对大鼠肝脏的损伤比较及敏感指标筛选[J].中国中药杂志,2015(04).

[4]庞晶瑶,柏兆方,牛明,涂灿,马致洁,赵艳玲,赵奎君,游云,王伽伯,肖小河.基于“有故无殒”的何首乌对正常和肝损伤大鼠的毒性与保护作用对比研究[J].药学学报,2015(08).

[5]吕旸,王伽伯,嵇扬,赵艳玲,马致洁,李奇,邹正升,梁庆生,滕光菊,鄢丹,张萍,肖小河,喻长远.提取溶剂对何首乌肝细胞毒性的影响[J].中国实验方剂学杂志,2013(20).

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