孙韬，王春霞，杜凯，马艳云，唐小凤

【摘 要】目的：評价葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）在类风湿关节炎（RA）诊断中的意义，并比较多种指标联合检测在RA诊断中的意义。方法：对178例确诊为RA的患者进行血清学指标检测，并进行回顾性分析。血清GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体、AFA检测均采用酶联免疫吸附法，采用χ2检验和Pearson相关分析对多种指标在RA诊断中的价值及相关性进行比较，并对不同指标间的联合检测进行讨论分析。结果：GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA在RA组的特异性和灵敏度分别为65.00%和70.22%、95.00%和84.83%、78.33%和72.47%、75.71%和63.48%。RA组中GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA阳性率分别为70.22%、84.83%、72.47%、63.48%，显著高于对照组的11.67%、5.00%、21.67%、13.33%，差异有统计学意义（P < 0.001）；任意3种或4种指标联合检测特异性较高，但敏感度降低，明显低于单项检测抗CCP抗体，差异有统计学意义（P < 0.001）；任意3种或4种指标联合检测较单一指标检测均具有较高的阳性率，差异有统计学意义（P < 0.001），尤其是GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA联合检测，RA组中阳性率可达96.07%。结论：GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA均可作为RA诊断的血清学指标，多种血清学指标联合检测有助于提升RA诊断的阳性率。

【关键词】 关节炎，类风湿；葡萄糖-6-磷酸异构酶；抗环瓜氨酸肽抗体；抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体；抗聚角蛋白微丝蛋白抗体；类风湿因子

Clinical Analysis of the Combined Detection of Serum GPI，Anti-CCP Antibody，Anti-MCV Antibody

and AFA in the Diagnosis of Rheumatoid Arthritis

SUN Tao，WANG Chun-xia，DU Kai，MA Yan-yun，TANG Xiao-feng

【ABSTRACT】Objective：To evaluate significance of glucose-6-phosphate isomerase（GPI）and anti-cyclic citrullinated peptide（CCP）antibody，anti-mutated citrullinated vimentin（MCV）antibody，antifilaggrin antibody（AFA）in the diagnosis of rheumatoid arthritis（RA），and to compare the significance of combined detection of multiple indicators in RA diagnosis.Methods：The serological indexes of 178 patients with RA were examined and analyzed retrospectively.Serum GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA were detected by enzyme-linked immunosorbent assay.χ2 test and Pearson correlation analysis were used to compare the value and correlation of multiple indicators in the diagnosis of RA，and the joint detection between different indicators was discussed and analyzed.Results：The specificity and sensitivity of GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA in RA group were respectively 65% and 70.22%，95% and 84.83%，78.33% and 72.47%，75.71% and 63.48%.In group RA，the positive rates of GPI，anti-CCP antibody，anti-MCV antibody and AFA

were 70.22%，84.83%，72.47% and 63.48% respectively，significantly higher than those in the control group，i.e.11.67%，5%，21.67% and 13.33%，and the difference was statistically significant（P < 0.001）.Any three or four indicators combined detection had high specificity but low sensitivity，significantly lower than that of the single detection of anti-CCP antibody，and the difference was statistically significant（P < 0.001）.Any three or four indicators combined detection had a higher positive rate，and the difference was statistically significant（P < 0.001），especially the combined detection of GPI，anti-CCP antibody，anti- MCV antibody and AFA（with a positive rate to 96.07%）.Conclusion：GPI，anti-CCP antibodies，anti-MCV antibodies and AFA can all be used as serological indicators for RA diagnosis.Combined detection of multiple serological indicators is helpful to improve the positive rate of RA diagnosis.endprint

【Keywords】 arthritis，rheumatoid；glucose-6-phospho isomerase；anti-cyclic citrullinated peptide antibody；

anti-mutant citrulline vimentin antibody；anti-keratin microfilament antibody；rheumatoid factor

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种常见的以滑膜炎及软骨损伤为特征的慢性自身免疫性疾病，易导致关节损害甚至残疾。早期诊断和及时治疗可以有效预防骨关节疾病恶化、功能丧失以及更为严重的后果[1]。大量研究表明，关节组织的不可逆损伤一般都会发生在患病后的2年之内。目前来说，RA最佳治疗时间是在疾病产生后3～6个月内，因此就需要在疾病早期阶段获得一个可靠的诊断指标[2]。目前，有多种RA相关抗体检测可作为疾病诊断的实验室指标，类风湿因子（RF）作为最常用的检测项目被广泛应用于RA的临床诊断，但其特异性较低。随后，研究人员发现的葡萄糖-6-磷酸异构酶[3]（GPI）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体[4]、抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体[5]、抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）[6]则具有较高的特异性。本研究旨在通过检测RA患者血清中GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA，分析4种不同自身抗体在RA中的表达及多种指标联合检测在RA诊断中的临床作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年5月至2016年12月在本院就诊的RA患者178例，男71例，女107例；年龄19～87岁，平均（53.93±12.62）岁；病程1～

17年，平均（6.13±2.79）年。所有患者均符合1987年美国风湿病学会（ACR）修订的RA分类标准。对照组为同期来本院健康体检者60例，男26例，女34例；年龄20～81岁，平均（56.32±10.18）岁。

1.2 仪器与试剂 深圳汇松HEALES-MB580酶标分析仪（深圳汇松科技发展有限公司）。GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA ELISA检测试剂盒（美国TSZ公司，生产批号TS-Z4402，201702）。

1.3 研究方法 GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA均采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测。阳性判断（Cut-Off值）：以样本阴性对照OD值 + 0.25（抗CCP抗体、AFA）；以样本阴性对照OD值 + 0.15（GPI、抗MCV），样本OD值﹥Cut-Off值，判定为阳性，反之，则为阴性。以上所有操作均严格按照试剂盒说明书执行。

1.4 统计学方法 采用GraphPad Prism 6.01软件进行统计分析。计量资料以表示，采用四格表计算4种抗体单独及联合诊断RA的各项评价指标；采用配对资料的χ2检验分析不同抗体的阳性检出率之间的差异性。以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 4种检测指标单独诊断RA的各项评价指标

GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA在RA阳性患者中的特异性和灵敏度分别为65.00%和70.22%、95.00%和84.83%、75.71%和63.48%、78.33%和72.47%，其中抗CCP抗体特异性和灵敏度均高于其他3种，差异有统计学意义（P < 0.001）；GPI特异性低，抗MCV抗体敏感度低；抗CCP抗体和GPI、抗MCV抗体、AFA的特异性及敏感度比较，差异均有统计学意义（P < 0.001）。见表1。

2.2 多种检测指标联合诊断RA的各项评价指标 联合检测时，GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体、GPI +抗CCP抗体 + AFA、GPI + 抗MCV抗体 + AFA、抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA、GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA在RA阳性患者中的特异性和灵敏度分别为83.33%和51.69%、88.33%和55.62%、93.33%和41.01%、91.67%和51.12%、98.33%和37.64%。其中对RA阳性患者特异性最高的是GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA，灵敏度最高的是GPI + 抗CCP抗体 + AFA。见表2。

2.3 4种检测指标在2组中的阳性率比较 RA组中GPI、抗CCP抗体、抗MCV抗体和AFA的阳性率分别为70.22%、84.83%、72.47%、63.48%，对照组中各检测指标的阳性率分别为11.67%、5.00%、21.67%、13.33%。两两比较，各组阳性率之间差异均有统计学意义（P < 0.001）。见表3。

2.4 多种指标联合检测在2组中的阳性率比较 RA组中GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体、GPI + 抗CCP抗体 + AFA、GPI + 抗MCV抗体 + AFA、抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA、GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA的阳性率分别为88.20%、91.01%、89.89%、85.96%、96.07%，对照组中各检测指标的阳性率分别为11.67%、5.00%、6.67%、3.33%、1.67%。两两比较，阳性率差异均有统计学意义（P < 0.001）。见表4。

3 讨 论

RA呈世界性分布，主要以女性患者多见，并且任何年龄均可发病。本研究资料显示，女性与男性患者的人数比例为1.5∶1，平均年龄（53.93±12.62）岁。目前，临床上選择的血清学检测指标主要是依靠RF，该指标具有较高的灵敏度；但特异性较差，其他感染性疾病或自身免疫性疾病也可呈阳性，甚至5%～10%的健康人群也会出现阳性[7]。GPI抗原作为一种多功能蛋白，在RA发病过程中对于血管增生、滑膜增殖及骨质破坏等方面起到了重要作用。因此，Zong等[3]将其作为一种新的诊断RA的血清学指标。Herve等[8]也发现RA患者血清中GPI抗原呈高浓度表达。本研究对178例RA患者血清进行GPI抗原检测，结果与之前报道一致，RA患者血清中具有较高水平的GPI抗原，但特异性较低。另外，RA患者GPI检测具有良好的阳性检出率，与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.001）。抗CCP抗体作为一种抗人工合成的环瓜氨酸肽，对RA无论是特异性还是敏感度都具有较高水平，诊断价值较高[4]。endprint

本研究结果显示，抗CCP抗体在RA诊断中表现出较高的特异性和灵敏度，与文献报道一致。AFA的发现被证实对RA的诊断具有较高的特异性。研究发现，AFA和抗CCP抗体可以识别瓜氨酸纤维蛋白[6]。随后的研究表明，瓜氨酸纤维蛋白对RA滑膜组织不具有较高的特异性，在脊柱关节疾病和骨关节炎滑膜内也都有被检出[9]。本研究发现，AFA在RA患者血清中具有良好的特异性和灵敏度，并且在RA组中具有较高的阳性率，与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.001）。波形蛋白是一类存在于细胞质中的中间纤维丝蛋白，该蛋白在巨噬细胞内随钙离子进入而被瓜氨酸化。MCV是表达在滑膜组织中的一类相关性自身抗体，瓜氨酸化和突变都会影响其蛋白抗原性。目前，抗MCV抗体已被证实是一种更为敏感的抗瓜氨酸蛋白抗体（ACPA）的抗原性靶点[6]。本研究对178例RA患者血清进行抗MCV检测，结果显示，其具有良好的特异性，但阳性率不是尤为突出（仅63.48%）。

关于对不同指标的联合检测，Szekanecz等[10]发现，抗MCV抗体检测能够鉴别一部分IgM-RF或者抗CCP抗体血清学阴性的RA患者，因此，抗CCP抗体和抗MCV抗体联合检测能够提高RA临床诊断阳性率。笔者的研究发现，通过对不同指标的联合检测，任意3种或4种指标联合检测时，特异性较单一指标有一定程度的升高，但灵敏度显著降低。尽管RF对RA的特异性不高，但RF持续性高滴度存在也能够预测RA疾病的发展。IgM-RFs持续高水平释放是RA的典型表现，同时这种抗体高水平的持续存在也会促使RA疾病的发

展[11]。抗CCP抗体在患者首次出现RA临床症状前14年就可在其血清中检测到，而IgM-RF在首次症状出现10年前也可被检测到[12]。研究表明，抗CCP抗体联合IgM-RF检测能够为诊断提供较为显著的灵敏度（可达88.2%），再加上抗MCV抗体和AFA的联合诊断可将RA诊断的敏感度提升到90.1%[11]。本研究进一步发现，多种指标联合检测时，特异性较单一指标显著升高，但灵敏度明显降低。多种指标联合检测较单一指标在RA组和对照组中的阳性检出率明显升高，尤其是GPI + 抗CCP抗体 + 抗MCV抗体 + AFA指标联合检测，可将临床诊断阳性率提升至96.07%。

综上所述，4项检测指标都有着良好的单项效能，均可用于RA临床诊断。在单项指标检测中，GPI特异性不高，而抗CCP抗体具有较高的特异性和灵敏度。对于RA疾病的诊断，4项指标联合检测可弥补单项指标诊断RA的不足，有助于提高阳性检出率，对于RA疾病的预防及早期治疗具有重要意义。因此，不同自身抗体多重联合血清学检测也会是今后疾病诊断和预后的有效手段。

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收稿日期：2017-07-14；修回日期：2017-08-30endprint