王起来，马寅芙，付建华，林秀英，刘 磊，芦小单，方艳秋，谭 岩

(吉林省人民医院 医学诊治实验中心，吉林 长春130021)

血清和卵泡液抗苗勒管激素在IVF-ET中的检测价值

王起来，马寅芙，付建华，林秀英，刘 磊，芦小单，方艳秋*，谭 岩

(吉林省人民医院 医学诊治实验中心，吉林 长春130021)

目的探讨非多囊卵巢综合征(PCOS)不孕患者在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中血清和卵泡液抗苗勒管激素(AMH)与临床结果的预测价值。方法选取进行IVF-ET患者(非PCOS原因不孕)共103例，根据获卵数分为低获卵组、正常组、高获卵组。检测自然月经周期第3天、取卵日和移植日血清AMH值以及卵泡液AMH值。依据统计学方法分析获卵数及临床妊娠与AMH水平的关系。结果低获卵组、正常组、高获卵组三组间窦卵泡数、总胚胎数在各组间比较均具有统计学差异(P<0.05)；三组自然月经周期第3天、取卵日和移植日血清AMH值以及卵泡液AMH水平存在差异，均为低获卵组<正常组<高获卵组，组间成对比较差异具有统计学意义(P<0.05)；卵泡液AMH水平妊娠组高于非妊娠组，差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血清和卵泡液AMH水平可作为预测获卵数的指标，而卵泡液AMH水平高低与临床妊娠具有相关性，可作为预测妊娠结局的指标。

IVF-ET；AMH；卵泡液

(ChinJLabDiagn,2017,21:2062)

生存环境恶化，生活、工作压力增加，生育年龄的推迟等因素导致现代社会育龄夫妇中不孕不育患者比率大幅增高。辅助生殖技术是解决这类患者生育问题唯一途径。体外受精-胚胎移植(IVF-ET)是ART中最常用的手段，依据患者卵巢储备功能而定的促排卵(COS)方案又是IVF-ET中最关键的一环。因此，患者卵巢储备功能评估就显得尤为重要。已有较多研究证实基础血清AMH是卵巢储备评估的可靠指标[1]。然而AMH与IVF-ET临床妊娠的关系尚不明确，而卵泡液内AMH在卵泡发育过程并促进优势卵泡成熟中发挥重要作用[2]，那么卵泡液AMH能否与IVF-ET中获卵及卵母细胞质量存在关系进而影响妊娠结局有待我们进一步研究。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取2014年3月至2015年3月在吉林省人民医院生殖医学中心接受IVF-ET助孕治疗的不孕症患者(非PCOS原因不孕或单纯男方因素)103例进行研究。依据获卵数分为低获卵组(获卵数<5枚)、正常组(5枚≤获卵数≤15枚之间)、高获卵组(获卵数>15枚)。

1.2 控制性超排卵方案及IVF-ET

依据不孕症患者基本情况(年龄、体重指数、基础内分泌等)，分别采用长方案、短方案进行超促排卵。取卵后，依据显微镜观察卵丘-卵母细胞复合体评估卵母细胞成熟情况。依据胚胎形态参数，移植Ⅰ-Ⅱ级胚胎2枚。移植后14天检测hCG(>5MIU/ml)为生化妊娠，移植后35天阴道B超可见孕囊为临床妊娠。

1.3 血清AMH测定

自然月经周期第3天、取卵日和移植日采空腹静脉血留样。自然月经周期第3天AMH值为基础AMH值。AMH采用酶联免疫法检测(深圳亚辉龙生物科技有限公司)，操作依照说明书进行。

1.4 卵泡液AMH测定

取卵日，经阴道B超引导穿刺取卵，收集卵泡液，2 500 g离心2 min，去沉淀，上清为所需卵泡液，测定AMH方法同1.3。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 低获卵组、正常组、高获卵组一般情况及获卵数、胚胎数比较

低获卵组、正常组、高获卵组3组间年龄和体质量指数(BMI)比较不具有统计学差异(P>0.05)；但是窦卵泡数、获卵数、总胚胎数在各组间比较均具有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 低获卵组、正常组、高获卵组一般情况及获卵数、胚胎数比较

注：*表示与低获卵组比较P<0.05；#表示与正常组比较P<0.05。

2.2 低获卵组、正常组、高获卵组血清及卵泡液AMH水平的比较

IVF-ET中低获卵组、正常组、高获卵组的基础血清、取卵日血清、移植日血清AMH水平和卵泡液AMH水平存在差异，均为低获卵组<正常组<高获卵组，并且通过组间成对比较差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同获卵数组间血清及卵泡液AMH水平的比较

注：*表示与低获卵组比较P<0.05；#表示与正常组比较P<0.05。

2.3 IVF患者临床妊娠结局与AMH水平比较

根据是否临床妊娠，将103例患者分为妊娠组(56例)与非妊娠组(47例)。两组间基础血清、取卵日血清、移植日血清AMH水平比较差异均不具有统计学意义(P>0.05)；但卵泡液AMH水平妊娠组高于非妊娠组，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 临床妊娠与各组AMH水平的关系

注：*表示P<0.05

3 讨论

抗苗勒管激素(AMH)是由窦前及小窦卵泡的颗粒细胞分泌的，随着卵泡的成熟其表达水平也显著下降[2]。血清中AMH水平在女性青春期后开始升高，很快达到峰值并在整个女性生育周期中持续存在，其作用为调控始基卵泡的募集，保持卵泡有序发育，促进卵泡优势选择，维持每月卵泡的成熟[3,4]。血清AMH水平取决于卵巢窦卵泡数量，可以用于评估卵巢储备功能并准确预测卵巢反应性[5]。在本研究结果显示控制性超排卵周期中，患者获卵数存在明显的不同，依据获卵数进行分组，比较发现自然月经周期第3日、取卵日、移植日血清AMH水平和卵泡液AMH水平在不同反应组均存在统计学差异。而且各组的血清AMH水平月经第3日>取卵日，反应出控制性超排卵周期中卵泡在Gn刺激下发育，血清AMH值随着窦卵泡数的减少而降低，外源性Gn药物超促排卵(COH)的刺激周期下卵泡发育过程中，血清AMH的下降反映了窦卵泡逐渐减少并最后形成成熟卵泡的过程[6]，这也同时证实了AMH主要表达于早期卵泡[7]，所以可反映卵泡的动态发育过程。提示血清AMH水平能较好地预测卵巢对COH的反应，血清AMH水平与可获得卵母细胞数的相关性最高。

IVF-ET临床妊娠结局有多方面因素决定，包括获卵率、卵母细胞成熟率、受精率、胚胎质量等[8，9]。血清AMH并不能反应所有相关指标，因此血清AMH水平预测临床妊娠结局存在争议。卵泡液是卵母细胞发育的微环境，其中存在众多活性因子构成精密复杂的调控始基卵泡启动的信息网络。这些活性因子分为促卵泡生长因子和抑制因子两类，其中AMH属于重要的抑制性细胞因子。Fanchin研究[10，11]显示取卵日获得的中小卵泡(8-12 mm)卵泡液中AMH的水平比大卵泡(16-20 mm)高两倍，提示AMH水平随着卵泡的成熟而持续下降；但在COH周期中，取卵日卵泡液AMH水平和胚胎种植率以及临床妊娠率呈正相关，而基础或取卵日血清AMH水平却和它无相关性[12]。在本研究结果显示临床妊娠组卵泡液AMH水平显著高于非妊娠组，提示高卵泡液AMH可能与卵泡成熟相关，能提高临床妊娠率。

综上所述，血清和卵泡液AMH水平可作为预测获卵数的指标，而卵泡液AMH水平高低与临床妊娠具有相关性。

[1]胡蓉,张晓梅,吴 昕，等.抗苗勒氏管激素(AMH)预测卵巢储备功能及反应性的研究[J].生殖与避孕,2009,29(8):515，557.

[2]王冬雪,吴小华.超促排卵过程中抗苗勒管激素动态变化及其与临床结局的相关性[J].中华生殖与避孕杂志,2017,37(2):111.

[3]何艺磊,李 蓉,乔 杰.抗苗勒氏管激素与卵巢储备及反应性相关研究进展[J].生殖与避孕,2016,36(8):653.

[4]邵静宜,马艳萍,李云秀.抗苗勒氏管激素与生殖[J].中国优生与遗传杂志,2012,20(5):13.

[5]胡琳莉,孙莹璞.卵巢储备功能与卵巢反应性评估[J].中国实用妇科与产科杂志,2015,31(1):18.

[6]陈 雅,叶碧绿,郑九嘉，等.血清及卵泡液抗苗勒管激素在多囊卵巢综合征患者体外受精促排卵治疗中的价值[J].中国临床药理学与治疗学,2015,20(12):1405.

[7]陈 晓,季银芬,徐 键.抗苗勒氏管激素(AMH)与多囊卵巢综合征(PCOS)卵泡发育异常的关系[J].生殖与避孕,2014,34(5):383，400.

[8]廖娇蕾,张 琼,李艳萍.子宫内膜厚度差预测IVF-ET妊娠结局的临床观察[J].生殖与避孕,2015,35(10):680.

[9]陈 艺,刘海鹏,李苏萍，等.抗苗勒氏管激素水平对IVF-ET妊娠结局的预测价值评估[J].生殖医学杂志,2016,25(6):522.

[10]Fanchin R,Louafi N,Mendez Lozano DH,et al.Per-follicle measurements indicate that anti-mtillerian hormone secretion is modulated by the extent of follicular development and luteinization and may reflect qualitatively the ovarian follicular status[J].Fertil Steril,2005,84(1):167．

[11]Fanchin R,Yaieb J,Lozano DH,et al.High reproducibility of serum anti-mtillerian hormone measurements suggest a multistaged follicular secretion and strengthens its role in the assessment of ovarian follicular status[J].Hum Reprod,2005,20(4):923．

[12]Wunder D,Bersinger N,Yared M,et al.Statistically significant changes of antimiillerian hormone and inhibin levels during the physiologicm enstrual cycle in reproductive age women[J]．Fertil Steri,2008,89(4):927.

Detectionvalueofanti-MullerianhormoneinserumandfollicularfluidinIVF-ET

WANGQi-lai，MAYin-fu,FUJian-hua,etal.

(CenterforMedicalTreatmentandDiagnosis,JilinProvincePeople’sHospital,Changchun130021,China)

ObjectiveTo investigate the predictive value of serum and follicular anti-Mullerian hormone (AMH) in patients with non-PCOS (infertility polycystic ovary syndrome) in vitro fertilization and embryo transfer (IVF-ET) and its clinical value.MethodsSelected for IVF-ET patients (non-PCOS causes infertility) a total of 103 cases,according to the number of oocytes were divided into low-ovulation group,normal group,high-egg group.On the 3rd day of natural menstrual cycle,serum AMH value of ovulation day and transplantation day and AMH value of follicular fluid were detected.According to statistical methods to analyze the relationship between the number of oocytes and clinical pregnancy and AMH levels.ResultsThe number of follicles and the total number of embryos in three groups of low ovum group,normal group and high ovulation group were statistically different (P<0.05).On the third day of natural menstrual cycle,the ovulation day AMH levels in follicular fluid and AMH levels in follicular fluid were all lower than those in control group (allP<0.05) Group than non-pregnancy group,the difference was statistically significant (P<0.05).ConclusionSerum and follicular fluid AMH levels can be used as an index to predict the number of oocytes,while the level of follicular fluid AMH levels associated with clinical pregnancy,pregnancy prediction can be used as an index.

IVF-ET；AMH；Follicular fluid

本文受吉林省卫生技术创新项目(2017J022、2016J015、2016ZC016)和吉林省科技厅项目(20150622024JC，20150414023GH，20160622008JC、20160414021GH)资助

*通讯作者

1007-4287(2017)12-2062-03

R446

A

王起来(1982-)，男，主管检验师，硕士，主要从事生殖医学临床检验及科研工作;方艳秋(1968-)，女，教授，博士，主要从事生殖医学相关研究。

2017-01-25)