郑志明，邹海鹏，林碧华，龙冰清

(1中山市小榄人民医院，广东中山528415；2滨州医学院烟台附属医院；3广东医科大学生物化学与分子生物学教研室；4广东省医学分子诊断重点实验室)

·论著·

耐药肝癌细胞p62表达与顺铂敏感性的关系

郑志明1，邹海鹏2，林碧华3,4，龙冰清1

(1中山市小榄人民医院，广东中山528415；2滨州医学院烟台附属医院；3广东医科大学生物化学与分子生物学教研室；4广东省医学分子诊断重点实验室)

目的观察顺铂耐药的肝癌细胞中p62的表达情况，及p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂敏感性的变化。方法培养肝癌亲本细胞HepG2、Huh7，通过浓度梯度法建立顺铂耐药细胞模型，采用Western blotting法检测亲本HepG2、Huh7细胞和耐药HepG2、Huh7细胞中的p62蛋白。将耐药HepG2、Huh7细胞分为沉默组和耐药组，分别转染p62 siRNA和siRNA Negative Control。在转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d测算沉默组和耐药组细胞存活率。转染后48 h进行Hochest 33258染色观察沉默组和耐药组细胞凋亡核形态、计数凋亡细胞，采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术测算细胞凋亡率。转染后48 h采用Western blotting法检测沉默组与耐药组细胞中的核因子红细胞前体2相关因子2(Nrf2)，RT-PCR法检测Nrf2蛋白下游的谷氨酸半胱氨酸合成酶(GCL)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、NADP(H)醌氧化还原酶(NQO1)、血红素氧化酶1(HO-1)、多药耐药蛋白(Mrp)基因。结果耐药的HepG2、Huh7细胞中p62蛋白相对表达量分别高于亲本HepG2、Huh7细胞(P均<0.05)。转染48 h后的0、1、2、3、4、5 d沉默组HepG2、Huh7细胞存活率低于耐药组(P均<0.05)。沉默组凋亡细胞数及凋亡率均高于耐药组(P均<0.05)。沉默组细胞中Nrf2蛋白及NQO1、GCL、GST、HO-1、Mrp mRNA相对表达量均低于耐药组(P均<0.05)。结论顺铂耐药的肝癌细胞中p62蛋白表达上调；p62基因沉默后耐药肝癌细胞对顺铂的敏感性增强，其机制可能与Nrf2及其下游基因表达下调有关。

肝癌；肝癌细胞；耐药；顺铂；p62；基因沉默；核因子红细胞前体2相关因子2

肝癌是最常见的恶性肿瘤之一[1]，中国是肝癌高发国家，肝癌发病率占世界总数的50.5%，病死率占世界总数的51.4%[2]。肝癌恶性程度高，易复发和转移，远期疗效并不理想[3]。……