闫硕，刘彦君，张馨方，秦萌，刘慧，朱家林，李贞，张青文，刘小侠



棉铃虫复眼中生物钟基因的昼夜表达模式

闫硕1,2，刘彦君1，张馨方3，秦萌2，刘慧2，朱家林4，李贞1，张青文1，刘小侠1

（1中国农业大学植物保护学院，北京100193；2全国农业技术推广服务中心，北京100125；3河北省农林科学院昌黎果树研究所，河北昌黎066600；4北京出入境检验检疫局，北京100026）

【】克隆并分析棉铃虫（)复眼()生物钟基因的cDNA序列,探讨棉铃虫复眼中生物钟基因的昼夜表达模式及其表达水平的影响因子，以确认其在复眼中是否起着调节生物节律的功能，为理解复眼中生物钟基因网络提供理论参考。【】以2日龄棉铃虫复眼为试验材料，采用RT-PCR和RACE末端扩增技术克隆棉铃虫生物钟基因。利用生物信息学软件对得到的棉铃虫CLK氨基酸序列进行生物信息学分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术，检测棉铃虫成虫不同器官(头、胸、腹、足、翅、脑、触角、复眼)中生物钟基因的表达水平；通过设置不同的光周期环境，检测复眼中生物钟基因的昼夜表达模式；通过在暗期设置6 h不同波段光 (UV、蓝光和绿光)照射，检测复眼中生物钟基因的表达水平；通过设置棉铃虫雌雄蛾交配处理，检测交配结束0 h和3 h复眼中生物钟基因的表达水平；通过饥饿处理棉铃虫雌雄蛾，检测复眼中生物钟基因的表达水平。【】克隆得到棉铃虫生物钟基因的cDNA序列，命名为(GenBank登录号为KM233158)，开放读码框1 860 bp，编码619个氨基酸组成的多肽，理论推测分子量(Mw)为69.32 kD，等电点(pI)为5.71。推导得到的氨基酸序列具有3个跨膜拓扑结构，包含多个昆虫CLK蛋白的保守区域(PAS和HLH)，其与甜菜夜蛾（）和黑脉金斑蝶()的同源性较高，分别为97%和74%。……