李新，顾晓川,2，龙海波，彭焕，黄文坤，彭德良



禾谷孢囊线虫果胶酸裂解酶新基因的鉴定与表达特征分析

李新1，顾晓川1,2，龙海波3，彭焕1，黄文坤1，彭德良1

（1中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京100193；2中国热带农业科学院橡胶研究所，海南儋州571737；3中国热带农业科学院环境与植物保护研究所农业部热带作物有害生物综合治理重点实验室，海口571101）

【】禾谷孢囊线虫（）是一种严重危害麦类作物的重要植物病原线虫，对农业生产造成巨大的经济损失，然而其致病机制和有效防控方法还有待进一步研究。通过克隆禾谷孢囊线虫的果胶酸裂解酶新基因，并对其表达特性进行分析，为后续探究的基因功能及其与寄主的互作提供理论依据，并为探讨禾谷孢囊线虫防控途径提供新思路。【】采用同源克隆结合RACE技术从禾谷孢囊线虫中克隆出一个新的果胶酸裂解酶基因；采用DNAMAN、Clustal、SignalP 4.0 Server和GSDS等相关生物信息学软件和在线工具分析该基因的核苷酸和氨基酸序列，并使用MEGA 5.0构建系统进化树；采用原位杂交和半定量PCR方法确定该基因的在禾谷孢囊线虫中的表达部位及其在线虫不同龄期中的表达情况。【】从禾谷孢囊线虫中成功克隆出一个果胶酸裂解酶基因（GenBank登录号GQ998895)，该基因cDNA全长1 717 bp，包含一个长度为1 563 bp的开放阅读框，编码一个长度为521个氨基酸残基的蛋白，其理论分子量为57.5 kD，理论等电点为8.52。从线虫基因组DNA中扩增获得长度为7 199 bp的基因组全长，基因结构显示分析发现，基因组包含14个外显子和13个内含子，除第3个内含子剪接位点是GC-AG外，其余12个内含子都符合真核生物基因剪接位点GT-AG规则。……