龙官保 肖朝文 张俊 赵新阳 黎昕 郑小林 蔡常春

·临床经验·

Rac1和Pak1在胰腺癌中的表达及其意义

龙官保 肖朝文 张俊 赵新阳 黎昕 郑小林 蔡常春

胰腺癌； Rack1； Pak1

Ras相关的C3肉毒素底物1( Ras-related C3 botulinum toxinsubstrate 1，Racl)是Rho家族(Ras homologue family，Rho)重要成员之一，p21蛋白活化激酶(p21-activated kinase 1，Pak1)是Rac1的效应物，是最早被鉴定的RHO GTP酶下游效应分子。Rac1和Pak1在多种肿瘤中异常高表达，与肿瘤分化程度及淋巴转移呈正相关[1-3]，本文对胰腺癌中Rac1及Pak1的表达情况进行了分析。

对象与方法

1.对象：2013年10月～2016年10月我科收入胰腺癌病人30例，均行根治性胰十二指肠切除手术，其中男性20例，女性10例。年龄43～64岁，平均年龄(55.52±10.13)岁，其中高分化腺癌10例，中分化腺癌12例，低分化腺癌8例。TNM分期(胰腺癌分期标准参考2011年NCCN中文版胰腺癌指南)：Ⅰ期及Ⅱ期10例，Ⅲ期及Ⅳ期20例，淋巴结转移18例，无淋巴结转移12例。所有患者均经病理检查确诊为胰腺腺癌，术前均未经放化疗及免疫治疗。

2.方法：免疫组化试剂盒购买于武汉博士德生物科技有限公司，兔抗人Rac1和兔抗人Pak1多克隆抗体购买于美国CST公司。按照试剂盒说明书操作流程行组织切片显色。200倍镜下每张切片选择10个有代表性的视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，共计数1000个细胞。Rac1和Pak1蛋白染色为在细胞内(膜/浆)呈棕黄色颗粒，界限清楚，无明显背景着色。Rac1和Pak1蛋白表达评估标准为：细胞染色呈黄褐色为阳性，细胞染色呈浅黄色或者无明显染色为阴性。采用IPP6.0图像分析系统分析切片阳性率。

3.统计学处理：应用SPSS 18.0软件对数据进行分析，计数资料用例(%)表示，采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1.Rac1和Pak1蛋白的表达：Rac1在胰腺癌组织中阳性表达率为83.33%，正常胰腺组织中的阳性表达率为43.68%。Pak1在胰腺癌组织中阳性表达率为83.33%，正常胰腺组织中的阳性表达率为47.83%。两组间比较均有统计学意义(P<0.05)。

2.Rac1和Pak1表达与临床病理之间的关系：Rac1和Pak1蛋白在低分化腺癌、Ⅲ期、Ⅳ期、淋巴结转移病人标本中的强阳性表达率高于高中分化腺癌组、Ⅰ期、Ⅱ期、无淋巴结转移病人标本，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。不同年龄、性别的胰腺癌病人间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 Rack1和Pak1蛋白表达与胰腺癌临床病理参数间的关系(例)

讨 论

Rac1是Rho家族中的重要成员，是与肿瘤侵袭、转移密切相关的小G蛋白，具有调节细胞骨架重组、影响细胞形体极化、促进细胞运动与迁移、抑制细胞凋亡的作用[4]。研究发现，活化后Rack1诱导肌动蛋白微丝在质膜上的聚集、产生片状伪足及膜多极化、调节细胞间黏附、调节细胞间质降解、促进细胞外基质降解等多种途径促进肿瘤侵袭转移[5-8]；负显性Rac1在缺氧情况下还可明显抑制缺氧诱导因子-1A(HIF-1A)的蛋白表达，从而抑制VEGF的转录，抑制肿瘤血管形成，减少肿瘤的侵袭[9]。Rac1还可能通过c-Jun和NF-kB(nuclear factor)途径上调了FasL的转录活性，增加FasL的表达，并且升高线粒体的膜电位和增加反应性氧簇的产生，增加细胞内超氧化物阴离子浓度，进而抑制肿瘤细胞凋亡的发生[10]。

Pak1是一种保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，是Rho家族小鸟苷三磷酸酶Cdc42和Rac1下游的重要靶蛋白，可以被很多种细胞外刺激因子激活，参与其信号通路，在细胞骨架重组、细胞迁移、细胞周期及基因转录调节方面起重要作用，提高细胞运动性侵袭力，有助于肿瘤的恶性进展[11]。Pak1蛋白通过磷酸化修饰Snail蛋白，抑制Snail蛋白的功能，促进癌细胞从上皮细胞样表型向低分化间质细胞样表型转化[12]。

本研究发现，Rac1和Pak1在胰腺癌组织中的阳性表达率高于正常胰腺组织，随着胰腺癌细胞浸润深度的增加、分化程度的降低及淋巴结转移的发生，Rac1和Pak1表达强阳性率明显增高，这可能与Rac1和Pak1在胰腺癌中被广泛激活有关。本研究结果表明，Rac1和Pak1是在胰腺癌中的过表达可作为评价胰腺癌恶性程度的有效指标。

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2017-02-10)

(本文编辑：杨泽平)

10.3969/j.issn.1005-6483.2017.10.009

430014 武汉，华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院肝胆胰外科

郑小林，Email：chenlan@medmail.com.cn