吕永楠 李晓艳 陈晶晶 任玮 刘欢

雌雄激素协同作用联合KLF4发挥抗动脉粥样硬化效应探究

吕永楠 李晓艳 陈晶晶 任玮 刘欢

作者单位：430060 湖北省武汉市，武汉大学人民医院心内科

目的 探讨睾酮、雌二醇和KLF4与急性心肌梗死相关性，评估其对冠心病的临床应用价值。方法 选择2017年1～5月我院心内科住院急性心肌梗死男性患者162例为试验组，134名健康男性为对照组。血清KLF4浓度采用酶联免疫吸附法测定，血清雌、雄激素检测采用化学发光免疫法测定。结果 对照组睾酮浓度高于试验组［（450.05±14.42）ng/dl比（33.49±2.43）ng/dl，P＜0.01］；试验组雌二醇较对照组明显升高［（277.32±13.84）pg/ml比（37.68±1.29）pg/ml，P＜0.01］；试验组 KLF4 浓度较对照组明显升高［（38.53±5.61）ng/ml比（15.83±2.99）ng/ml，P＜0.01］。在 AMI相关性分析中，KLF4与睾酮呈负相关，KLF4 与雌二醇呈正相关（P＜0.05）。结论 雌、雄激素协同作用联合KLF4对防治动脉粥样梗化（AS）具有临床应用价值，为冠心病防治提供新的治疗思路。

急性心肌梗死； 睾酮； 雌二醇； KLF4

动脉粥样硬化（atherosclerotic，AS）是一种多因素导致的慢性炎症反应性疾病[1]。研究证实，炎症在AS初始阶段和进展阶段发挥关键作用，贯穿于AS全过程，从内皮细胞的损伤到复合型病变的产生，大量炎性因子参与其中，对AS病理过程发挥了关键的作用[2]。同时，炎症与斑块的不稳定性密切相关，易导致严重心血管事件发生，如急性冠脉综合征、心源性猝死等，因此抑制炎症是AS防治的关键环节。研究发现，核转录因子KLF4具有保护血管内皮细胞、抑制炎症因子浸润、减少AS斑块形成和防止血栓形成的作用[3]。同时，研究已经证实，性激素包括睾酮（testosterone）和雌二醇（estradiol）对AS中的炎症反应具有不同程度的抑制作用。基于人体生理状态，每个人都有雌、雄激素存在，但不同性别雌性激素比例有差异[4]。因此，本研究通过对急性心肌梗死（AMI）患者和健康人群雌、雄激素和KLF4浓度检测，探讨雌雄激素协同作用通过KLF4发挥抗动脉粥样硬化效应的作用机制，为AS的防治提供新途径，具有重要的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 根据冠心病诊断标准[5]，选择2017年1～5月在武汉大学人民医院心内科住院的162例男性AMI患者为试验组；选取134名健康男性为对照组。所有试验组患者均排除冠心病之外脑梗死、肺栓塞、静脉血栓等血栓性疾病、感染性疾病、免疫性疾病、肿瘤、肝肾功能不全等疾病。

1.2 检测指标与方法

1.2.1 血清KLF4检测 研究对象均在禁食8 h后清晨采血，待标本血液凝固后分离血清，置入有盖试管中-70℃贮存。检测时从冰箱取出，待室温溶解后，酶联免疫吸附法测定KLF4浓度。

1.2.2 血清雌雄激素检测 性激素睾酮和雌二醇利用德国Simenns Advia Centaur XP仪器，采用竞争性直接化学发光免疫测定技术检测。

1.3 统计学方法 采用SPSS 19.0统计学软件进行统计分析。计量资料均呈正态分布且方差齐，以±s表示，两两比较采用t检验；KLF4与睾酮、雌二醇相关性分析采用Pearson相关性分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组雌、雄激素指标分析 对照组睾酮浓度明显高于试验组［（450.05±14.42）ng/dl比（33.49±2.43）ng/dl，P＜0.01］；试验组雌二醇较对照组明显升高［（277.32±13.84）pg/ml比（37.68±1.29）pg/ml，P＜0.01］。见表 1、图 1。

2.2 两组KLF4指标分析 试验组KLF4浓度较对照组明显升高［（38.53±5.61）ng/ml比（15.83±2.99）ng/ml，P＜0.01］，见表 2、图 2。

表1 两组睾酮和雌二醇浓度（±s）

表1 两组睾酮和雌二醇浓度（±s）

?

表2 对照组和试验组KLF4浓度（±s）

表2 对照组和试验组KLF4浓度（±s）

?

图1 对照组和试验组血清睾酮和雌二醇浓度

图2 对照组和试验组血清KLF4浓度

2.3 试验组KLF4与睾酮、雌二醇的相关性 试验组KLF4与睾酮呈负相关，相关系数-0.197，P=0.003。试验组KLF4与雌二醇呈正相关，相关系数0.151，P=0.033。

3 讨论

研究证实，性别和年龄是冠心病独立危险因子，提示性激素与冠心病的发生有密切关系[6]。雌雄激素比例失衡，导致免疫功能紊乱，上调炎症因子表达，促进炎症反应，并且与低密度脂蛋白胆固醇密切相关，低密度脂蛋白胆固醇是AS独立危险因子，最终促使冠心病发病风险急剧升高[7]。既往研究证实，雌激素对心血管具有保护作用。但是雌激素替代治疗相关临床试验荟萃研究提示，单纯口服雌激素会增加患者凝血功能，增加静脉血栓形成和脑卒中风险[8,9]。因此，单纯给予患者雌激素替代治疗会造成体内雌雄激素水平失衡。研究发现，雄激素为激素替代治疗提供了新思路，睾酮可以有效降抑制炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α表达，并增强抗炎因子IL-4和IL-10表达，还可以提高机体纤维蛋白溶解系统作用和抗凝血酶Ⅲ的活性，起到抗血栓形成的作用，延缓AS病理进展，降低血栓形成和卒中风险[10]。

本研究发现，试验组雌二醇水平较对照组明显升高，睾酮激素水平下降，提示AMI患者在急性心血管事件中，雌雄激素比例失调，功能紊乱，促进炎症事件发展，诱导不稳定斑块破裂和急性血栓形成。因此，给予AMI患者雌雄激素干预治疗具有一定的临床应用前景。

KLF4是Krüppel样因子家族成员之一，属锌脂蛋白类转录因子，在血管内皮细胞中具有特异性表达[3]。研究发现，促炎因子刺激和剪切应力可诱导KLF4的表达[11]；KLF4过表达可上调eNOS和血栓调节蛋白[12]；KLF4缺失可增加 TNF-α诱导的VCAM-1和TF的表达，KLF4可抑制炎症因子IL-1、IL-6等表达[13]。本研究中，试验组患者KLF4浓度较对照组升高，提示AMI患者内皮细胞损伤，诱导炎症因子过表达，促使KLF4表达进而抑制炎症反应，发挥抗炎作用。

雌雄激素协同联合KLF4发挥抗AS作用具有一定的可行性。试验组相关性分析发现，KLF4与雌激素呈正相关，与睾酮呈负相关。纠正AMI患者雌雄激素功能紊乱，联合KLF4共同发挥抗AS作用，有利于保护血管内皮细胞，防止炎症反应进展，具有一定的临床应用价值，为冠心病防治提供新的治疗思路。

［1］Ross R.Atherosclerosis-an inflammatory disease.N Engl J Med，1999，340：115-126.

［2］Patel S，Celermajer DS，Bao S.Atherosclerosis-underlying inflammatory mechanisms and clinical implications.Int J Biochem Cell Biol，2008，40：576-580.

［3］Czepluch FS，Vogler M，Kuschicke H，et al.Circulating Endothelial Cells Expressing the Angiogenic Transcription Factor Krüppel-Like Factor 4 are Decreased in Patients with Coronary Artery Disease.Microcirculation，2015，22：700-710.

［4］Vitale C，Mendelsohn ME，Rosano GM.Gender differences in the cardiovascular effect of sex hormones.Nat Rev Cardiol，2009，6：532-542.

［5］Right RS，Anderson JL，Adams CD，et al.2011 ACCF/AHA focused update incorporated into the ACC/AHA 2007 Guidelines for the Management of Patients with Unstable Angina/Non-ST——Elevation Myocardial Infarction:a report of the American College of Cardiology Foundation/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines developed in collaboration with the American Academy of Family Physicians，Society for Cardiovascular Angiography and Interventions，and the Society of Thoracic Surgeons.J Am Coll Cardiol，2011，57：e215-367.

［6］Van Lunzen J，Altfeld M.Sex differences in infectious diseasescommon but neglected.J Infect Dis，2014，209：S79-80.

［7］Dai W，Li Y，Zheng H.Estradiol/Testosterone Imbalance:Impact on Coronary Heart Disease Risk Factors in Postmenopausal Women.Cardiology，2012，121：249-254.

［8］Farquhar C，Marjoribanks J，Lethaby A，et al.Long term hormone therapy for perimenopausal and postmenopausal women.Cochrane Database Syst Rev，2017，1：CD004143.

［9］Enserink M.Women′s health.The vanishing promises of hormone replacement.Science，2002，297：325-326.

［10］Yildiz O，Seyrek M.Vasodilating mechanisms of testosterone.Exp Clin Endocrinol Diabetes，2007，115：1-6.

［11］Hale AT，Tian H，Anih E，et al.Endothelial Kruppel-like factor 4 regulates angiogenesis and the Notch signaling pathway.J Biol Chem，2014，289：12016-12028.

［12］Shen B，Smith RS Jr，Hsu YT，et al.Kruppel-like factor 4 is a novel mediator ofKallistatin in inhibiting endothelial inflammation via increased endothelial nitric-oxide synthase expression.J Biol Chem，2009，284：35471-35478.

［13］Zhou G，Hamik A，Nayak L，et al.Endothelial Kruppel-like factor 4 protects against atherothrombosis in mice.J Clin Invest，2012，122：4727-4731.

The synergistic effect of estradiol and testosterone joint KLF4 play against anti-atherosclerotic effect

LÜ Yong-nan，LI Xiao-yan，CHEN Jing-jing，et al.Department of Cardiology，Renmin Hospital of Wuhan University，Wuhan 430060，China

ObjectiveThis study focused on the relationship between testosterone，estradiol，KLF4 and acute myocardial infarction （AMI）to investigate the value of clinical application in coronary atherosclerotic heart disease（CHD）.MethodsWe enrolled 162 AMI male patients who admitted to the Department of Cardiology at Renmin Hospital of Wuhan University between January 2017 and May 2017 into the experimental group，and enrolled 134 healthy men into the control group.The enzyme-linked immunosorbent assays （ELISAs）were used to measure the serum KLF4 level.Testosterone and estradiol were assessed through a competitive immunoassay using direct chemiluminescent technology.ResultsThe serum levels of KLF4 and estradiol were higher in the experimental group than in the control group.KLF4 （38.53±5.61）ng/ml vs （15.83±2.99）ng/ml，estradiol （277.32±13.84）pg/ml vs （37.68±1.29）pg/ml.The serum levels of testosterone was lower in the experimental group than in the control group（450.05±14.42）ng/dl vs（33.49± 2.43）ng/dl.KLF4 positively correlated with the level of estradiol，which negative correlated with the level of testosterone（P＜0.05）.ConclusionThe synergistic effect of estradiol and testosterone jointed KLF4 plays anti-atherosclerotic effect，and had very important clinical value.

Acute myocardial infarction； Testosterone； Estradiol； KLF4

LI Xiao-yan，E-mail：xy.li@whu.edu.cn

国家自然科学基金（项目编号：81170307）

李晓艳，E-mail：xy.li@whu.edu.cn

10.3969/j.issn.1672－5301.2017.10.006

R542.2+2

A

1672-5301（2017）10-0886-03

2017-06-11）