任志文，谢岩，赵冬，刘祺，王洋，许健，王业忠

（新疆石河子大学医学院第一附属医院 1.神经外科，2.老干一科，新疆 石河子 832008）

DAT和D2R在垂体腺瘤组织中的表达及其意义

任志文1，谢岩2，赵冬1，刘祺1，王洋1，许健1，王业忠1

（新疆石河子大学医学院第一附属医院 1.神经外科，2.老干一科，新疆 石河子 832008）

目的 探讨垂体腺瘤组织中多巴胺转运体（DAT）和多巴胺D2受体（D2R）的表达变化及其意义。方法选取179例手术治疗的垂体腺瘤患者，根据术前内分泌激素检查和术后病理学检查结果，将患者分为泌乳腺瘤（PRL）45例、生长激素腺瘤（GH）43例、促肾上腺皮质激素腺瘤（ACTH）32例及无功能垂体腺瘤（NFPA）59例，免疫组织化学法检测垂体腺瘤组织和瘤旁正常组织中DAT、D2R的表达，分析D2R、DAT在垂体腺瘤组织中表达的相关性。结果 PRL、GH及ACTH组织中D2R、DAT表达高于NFPA和瘤旁正常组织，PRL和GH组织中D2R、DAT表达高于ACTH组织（P＜0.05）；D2R、DAT在垂体腺瘤组织中的表达与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤质地、KNOSP分级、是否侵袭及是否复发无关（P＞0.05）；Spearman相关分析显示，D2R在垂体腺瘤组织中的表达与DAT呈正相关（r=0.571，P=0.000）。结论 D2R、DAT在PRL和GH腺瘤组织中呈高表达，而在ACTH和NFPA腺瘤中组织呈低表达，提示多巴胺代谢紊乱可能参与不同病理学类型垂体腺瘤的发生。

垂体腺瘤；多巴胺转运体；多巴胺D2受体；表达

Abstract:Objective To investigate the changes of expressions of dopamine transporter (DAT)and dopamine D2 receptor (D2R)in pituitary adenomas and their significance.Methods In this study,179 cases of patients with pituitary adenomas undergoing surgical treatment were selected.According to the results of preoperative hormone examination and postoperative pathologic test,the patients were divided into prolactinoma(PRL,n=45),growth hormone adenoma (GH,n=43),adrenocorticotropic adenoma (ACTH,n=32)and nonfunctioning pituitary adenoma (NFPA,n=59)groups.The expressions of DAT and D2R in the pituitary adenomas and the adjacent normal tissues were detected using immunohistochemistry.The correlations between the expressions of D2R and DAT in the pituitary adenoma tissues were analyzed by Spearman correlation analysis.Results Qualitative and semi-quantitative analysis results showed that,the expressions of D2R and DAT in the PRL,GH and ACTH tissues were higher than those in the NFPA and adjacent normal tissues,and the expressions of D2R and DAT in the PRL and GH tissues were higher than those in the ACTH tissues,the differences were statistically significant (P＜0.05).The expressions of D2R and DAT in the pituitary adenoma tissues were notrelated with gender,age,tumordiameter,tumortexture,KNOSP classification,tumor invasion or recurrence(P＞0.05).Spearman correlation analysis showed that the expression of D2R in the pituitary adenoma tissues was positively correlated with the expression of DAT (r=0.571,P=0.000).Conclusions D2R and DAT are highly expressed in PRL and GH adenoma tissues,but lowly expressed in ACTH and NFPA tissues.It suggested that dopamine metabolic disorders may be involved in thepathogenesis of different types of pituitary adenomas.

Keywords:pituitary adenoma;dopamine transporter;dopamine D2 receptor;expression

近年来垂体腺瘤发病率呈升高趋势[1]，常影响神经及内分泌功能，部分甚至具有恶性肿瘤特质而侵袭鞍区[2]。多巴胺受体激动剂作为一线药物常用于泌乳腺瘤（prolactinoma，PRL）的治疗，但对其他病理类型垂体腺瘤疗效有限[3]，多巴胺D2受体（dopamine D2receptor，D2R）作为多巴胺直接作用位点，与多巴胺受体激动剂疗效密切相关[4]。多巴胺转运体（dopamine transporter，DAT）在多巴胺重新摄取及维持脑内多巴胺平衡中发挥重要作用[5]。本研究拟分析D2R、DAT在垂体腺瘤组织中的表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年2月-2015年3月新疆石河子大学医学院第一附属医院神经外科行手术治疗的垂体腺瘤患者179例，其中，男性94例，女性85例；平均年龄（45.9±11.8）岁。所有患者术前行鞍区影像学检查明确鞍区占位病变，排除垂体腺瘤囊变或卒中、混合性垂体腺瘤，以及标本组织较小或血块较多无法完成检查者。根据术前内分泌激素检查和术后病理学检查结果，将患者分为功能性垂体腺瘤：PRL45例、生长激素腺瘤（growth hormone adenoma，GH）43例、促肾上腺皮质激素腺瘤（adrenocorticotropic hormone adenoma，ACTH）32例，以及无功能垂体腺瘤（no functional pituitary adenoma，NFPA）59例。所有研究对象术中留取垂体腺瘤及瘤旁正常组织标本，甲醛固定，石蜡包埋，切片，保存于4℃条件备检。本研究通过医院伦理委员会批准，所有患者知情同意。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂 D2R和DAT单克隆抗体购自上海信裕生物科技有限公司，免疫组织化学试剂盒和DAB染色剂均购自福州迈新生物公司。

1.2.2 免疫组织化学法染色 取石蜡组织标本切片，脱落后，用梯度乙醇水化，用柠檬酸盐抗原修复液进行抗原修复，加入过氧化物酶阻断液。分别加入D2R、DAT单克隆抗体（稀释比例1∶200），4℃过夜孵育。PBS洗涤3次，加入通用型二抗羊抗兔IgG，室温下孵育20 min，PBS洗涤3次，DAB染色，苏木素复染、返蓝、脱水、封片。以PBS替代一抗作为空白对照。

1.2.3 结果判定 由2位副主任以上职称的病理科医师采用双盲法进行阅片，每张切片随机取5个高倍视野，根据染色强度和阳性细胞百分比进行综合判定：①染色强度：无染色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，深棕褐色3分；②阳性细胞百分比：＜10%为1分，11%～50%为 2分，51%～75%为 3分；＞75%为4分；③两部分相乘，≥3分为阳性表达，＜3分为阴性表达。利用日本Nikon公司ECLIPSE 80i图像分析系统对免疫组织化学法染色切片进行半定量分析，在同一条件下对切片进行扫描采集，每张切片随机取5个高倍视野，测定图像吸光度（A值），以5个视野的均值作为该例的测量结果。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 21.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组比较用单因素方差分析，组间两两比较用LSD-t检验，计数资料以率表示，用χ2检验，两两比较校正检验水准，相关分析用Spearman法，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 D2R、DAT在垂体腺瘤组织中的表达

免疫组织化学法结果显示，D2R主要集中在细胞核，染色呈黄褐色，在瘤旁正常组织中，可见少量阳性细胞，而在垂体腺瘤组织中，可见大量的细胞核被染成黄褐色，呈强阳性细胞（见图1）。DAT主要集中在细胞质中，染色呈黄褐色，在瘤旁正常组织中表达，可见少量细胞核周围细胞质呈棕黄色染色，而在垂体腺瘤组织中，可见大量的细胞质呈黄褐色染色（见图 2）。

定性分析结果显示，PRL、GH、ACTH、NFPA 及瘤旁正常组织中D2R阳性表达率比较，经χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），PRL、GH及ACTH组织中D2R表达高于NFPA和瘤旁正常组织，PRL和GH组织中 D2R表达高于 ACTH组织；PRL、GH、ACTH、NFPA及瘤旁正常组织中DAT阳性表达率比较，经 χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），PRL、GH及ACTH组织中DAT表达高于NFPA和瘤旁正常组织，PRL和GH组织中DAT表达高于ACTH组织。见表1。

半定量分析结果显示，PRL、GH、ACTH、NFPA及瘤旁正常组织中D2R、DAT吸光度A值比较，经方差分析，差异有统计学意义（P＜0.05），两两比较，经LSD-t检验，PRL、GH及ACTH组织中D2R、DAT表达高于NFPA和瘤旁正常组织，PRL和GH组织中D2R、DAT表达高于ACTH组织。见表2。

图1 D2R在垂体腺瘤组织中的表达 （免疫组织化学法×400）

图2 DAT在垂体腺瘤组织中的表达 （免疫组织化学法×400）

表1 D2R、DAT在垂体腺瘤组织中的表达比较

表2 D2R、DAT在垂体腺瘤组织中表达的A值比较

2.2 D2R、DAT在垂体腺瘤组织中的表达与临床病理特征的关系

D2R、DAT在垂体腺瘤组织中的表达与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤质地、KNOSP分级、是否侵袭及是否复发无关（P＞0.05）。见表3。

表3 临床病理特征与D2R、DAT在垂体腺瘤组织中表达的关系

续表3

2.3 D2R、DAT在垂体腺瘤组织中表达的相关性

Spearman相关分析显示，D2R在垂体腺瘤组织中的表达与DAT呈正相关（r=0.571，P=0.000）。见表4。

表4 D2R、DAT在垂体腺瘤组织中表达的相关性 例

3 讨论

垂体腺瘤作为颅脑常见良性肿瘤类型，其危害不容小视，可导致机体内分泌功能发生改变，而引起一系列病理改变，破坏人体内环境的稳定，严重影响人体正常生理功能[6]。临床上在对垂体腺瘤进行药物治疗时发现[7]，不同病理学类型的垂体腺瘤对不同药物治疗敏感性不同。多巴胺受体激动剂（以溴隐亭为代表）对PRL腺瘤治疗有效，可使76%～93%患者的血清PRL水平恢复正常，并使瘤体变小[8]，而在治疗其他病理类型垂体腺瘤时却作用有限，只对部分患者有效。有研究指出，多巴胺受体激动剂在治疗垂体腺瘤时的疗效差异可能与不同垂体腺瘤中D2R有关[4]。DAT在多巴胺信号传导中发挥重要作用。研究表明，D2R和DAT在多种神经系统疾病中出现表达异常[9-10]。

本研究结果显示，PRL、GH及 ACTH组织中D2R、DAT阳性表达率高于NFPA和瘤旁组织，PRL和GH组织中D2R、DAT阳性表达率高于ACTH，说明在不同病理学类型垂体腺瘤中，D2R、DAT出现表达差异，而这也正解释不同病理类型垂体腺瘤对多巴胺受体激动剂敏感性不同，垂体腺瘤组织中D2R越多，多巴胺受体激动剂作用靶点越多，从而使其更好地发挥效果，同时，DAT在调控多巴胺稳态中发挥重要作用[11]，高表达的DAT可能导致多巴胺稳态被打乱。本研究显示，D2R、DAT在垂体腺瘤组织中的表达与性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤质地、KNOSP分级、是否侵袭及是否复发无关，说明垂体腺瘤组织中D2R、DAT表达并不受一般临床特征的影响，只与病理学分型有关。Spearman相关分析显示，D2R在垂体腺瘤组织中表达与DAT呈正相关，过表达的D2R可能与DAT相互作用而使多巴胺作用减弱，使多巴胺对PRL细胞分泌、增殖的抑制作用减缩[12]，具体作用机制尚待进一步研究明确。

综上所述，D2R、DAT在不同病理学类型垂体腺瘤组织中表达不同，多巴胺代谢紊乱可能参与不同病理学类型垂体腺瘤的发生，但具体机制待进一步研究明确。

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（童颖丹 编辑）

Expressions and significance of DAT and D2R in pituitary adenoma tissues

Zhi-wen Ren1,Yan Xie2,Dong Zhao1,Qi Liu1,Yang Wang1,Jian Xu1,Ye-zhong Wang1
(1.Department of Neurosurgery,2.Department of Geriatrics,the First Affiliated Hospital of Medical College,Shihezi University,Shihezi,Xinjiang 832008,China)

R736.4

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.23.007

1005-8982（2017）23-0038-05

2016-12-21

王业忠，E-mail：3081217747@qq.com；Tel：13899526062