张真真，郑亚秋，段永建， 杜钢军

1.河南大学药学院 药物研究所，河南 开封 475004；2.河南大学 第一附属医院,河南 开封 475004

脂多糖对乌拉坦诱导小鼠肺癌的促进作用

张真真1，2，郑亚秋1，段永建2， 杜钢军1

1.河南大学药学院 药物研究所，河南 开封 475004；2.河南大学 第一附属医院,河南 开封 475004

〔目的〕 观察脂多糖(LPS)对乌拉坦诱导小鼠肺癌是否有促进作用。〔方法〕 乌拉坦(600 mg/kg)腹腔注射建立肺癌小鼠模型，LPS组尾静脉注射，实验期间观察小鼠体质量、饮食、自主活动变化，实验结束时处死小鼠，测定小鼠血清中脂氧素A4含量和血液中白细胞数，解剖观察小鼠肺荷瘤数。〔结果〕 与模型组相比，LPS组小鼠肺癌形成时间缩短，脂氧素A4 含量和白细胞数都较高(P<0.05)，小鼠肺荷瘤数较多且瘤体较大，小鼠体质量、饮食、自主活动变化差异无统计学意义。〔结论〕LPS对乌拉坦诱导小鼠肺癌有促进作用，其联合造模是快速建立小鼠肺癌模型的一种好方法。

脂多糖；炎症；乌拉坦；小鼠肺癌模型

Abstract: 〔Objective〕To observe the effect of LPS on Urethane-induced lung cancer in mice. 〔Methods〕The mouse model of lung cancer was established by injecting 600 mg/kg urethane into abdomen. LPS group was injected lps intravenously. The body weight, diet and autonomic activity were observed in mice. The mice were sacrificed at the end of the experiment. The content of lipoxin A4 in the serum , the number of leukocyte in blood were detected, and lung tumor was observed in mice. 〔Results〕Compared with the model group, in LPS group, lung cancer formation was earlier, the content of lipoxin A4 , the number of leukocytes were higher (P<0.05), the number of lung tumors was more, and the tumor volume was larger . There were no statistically significant differences in body weight 、diet and autonomic activity between the two groups. 〔Conclusion〕LPS can promote the lung cancer in mice induced by urethane, and its combination with urethane is a good method to establish mouse lung cancer model.

Keywords: LPS; inflammation; urethane; mouse lung cancer model

肺癌是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，死亡率呈逐年上升趋势。我国是肺癌高发区，每年都有十几万人死于肺癌，肺癌已成为恶性肿瘤死亡的首要原因[1]。为了更好地了解与治疗肺癌，建立与临床肺癌生物学类似，重现性好，发病率高的肺癌动物模型是十分必要的。在肺癌防治相关研究中，乌拉坦诱发肺癌模型已得到较为广泛的应用[2]，乌拉坦染毒后，对小鼠摄食，生长发育和体质量的增长都未见明显影响，一般毒性作用较轻且无剂量蓄积作用[3]，因此，乌拉坦可作为较理想的造模选择。孙婷等[4]实验表明,乌拉坦诱导的肺癌模型与临床人体肺癌发病具有较大的相似性，且这种造模方式可建立稳定均一、重现性好的小鼠肺癌模型。本实验采用乌拉坦造模方式，来观察和评价LPS对乌拉坦诱导的小鼠肺癌是否有促进作用，以期使乌拉坦小鼠肺癌模型周期更短、更加适合肿瘤防治药物筛选与评价。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康昆明雌鼠40只，6～8周龄，体质量18～20 g，由河南省医学实验动物中心提供(合格证号:豫动合字 101 号)。

1.2 药品及试剂

LPS(美国sigma公司)；乌拉坦(美国sigma公司)；脂氧素A4试剂盒(伊莱瑞特生物科技有限公司)。

1.3 实验器材

电子天平(上海精密仪器有限公司)；电子体温计(香港泰克曼电子仪器有限公司)；ZH-YLS-1A多功能小鼠自主活动记录仪(淮北正华生物仪器设备有限公司)；YN-ZD-2相机(奥林巴斯有限公司)；全自动动物血液细胞分析仪(南京普朗医疗设备有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 癌模型建立 将小鼠随机分为模型组和LPS组，每组各20只。两组小鼠同时腹腔注射乌拉坦溶液(600 mg/kg)，每周一次，共10次。在注射乌拉坦的第二天，LPS组小鼠给予尾静脉注射LPS(1 mg/kg)，模型组给予等量的生理盐水，直至处死当天。

1.4.2 观察指标 记录小鼠体质量、饮食及自主活动变化。在第16周，随机选取两组各半数小鼠处死，取其肺组织对比观察，拍照记录。在第24周处死剩余小鼠，收集血液采用全自动动物血液细胞分析仪测定血中白细胞含量；试剂盒测定小鼠血清中脂氧素A4含量；对小鼠肺荷瘤数及瘤体大小拍照统计。

1.5 统计学分析

应用SPSS 18.0软件进行统计学分析,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两两比较采用t检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LPS对乌拉坦诱导的肺癌小鼠肺的影响

与模型组相比，在第16周时，LPS组小鼠的肺荷瘤数较多、瘤直径较大且瘤产生初期现象明显。在第24周时，LPS组小鼠的肺荷瘤数明显较多，且瘤体较大。两组间差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、图1。

表1 LPS对小鼠肺瘤结节数与瘤直径影响

图1 小鼠不同时间段肺癌表现

2.2 LPS对乌拉坦诱导的肺癌小鼠白细胞的影响

2.3 LPS对乌拉坦诱导肺癌小鼠脂氧素A4的影响

2.4 LPS对乌拉坦诱导的肺癌小鼠体质量、饮食、自主活动变化的影响

图2 两组小鼠血液中白细胞数目比较

图3 两组小鼠血清中脂氧素A4的含量比较

组别体质量饮食自主活动LPS组30.382.0130.181.10119.803.10模型组30.232.6229.461.10119.012.51

3 讨论

近年来,由于大气污染严重以及女性吸烟者日益增多，肺癌患者越来越多，并呈现年轻化趋势[5]，肿瘤流行病学研究[2]资料显示，肺癌的发病率和死亡率已居恶性肿瘤之首。炎症是机体抵抗病原入侵、修复组织细胞损伤的重要防御机制之一, 也是多种疾病发生发展的基本病理过程,据相关研究证明，多种肿瘤的发生都与炎症有关，如HP感染性相关胃炎及胃癌、肝炎与肝细胞癌、炎症性肠病与结直肠癌等。目前认为，炎症已经成为肿瘤的一个基本特征[6]，长期的慢性炎症是病原微生物导致肿瘤发生的关键因素[7]。炎症反应不仅可以杀伤肿瘤细胞也可被肿瘤细胞利用，帮助其实现免疫逃逸[8]。

脂多糖(LPS)是革兰阴性菌细胞壁的主要成分,对宿主有毒性，不同细菌的完整脂多糖可以特异性地结合在人单核细胞和巨噬细胞表面通过活化单核巨噬细胞和T淋巴细胞以及中性粒细胞等，产生一系列炎症反应，可导致内毒素性休克、全身炎症反应综合征和多器官功能衰竭等疾病。有研究[9]发现，LPS可促进肿瘤细胞的增值， 为了更快、更好地建立稳定均一、重现性好且与临床人体肺癌发病具有较大相似性的小鼠肺癌模型，我们探究了LPS对乌拉坦诱导的小鼠肺癌的影响，观察到LPS组小鼠肺荷瘤数较多，瘤体积较大，瘤形成时间相对缩短，且检测到这组小鼠血常规中白细胞较多，血清中脂氧素A4含量较高。

综上所述，LPS对乌拉坦诱导小鼠肺癌有促进作用，其机制与炎症产生密切相关，其联合造模是一种快速建立小鼠肺癌模型的好方法。

[1] 郑亚秋,耿胜男,孟明静,等.川乌对小鼠二阶段皮肤乳头状瘤的抑制作用[J].河南大学学报(医学版),2016,35(1)：5-8.

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[4] 孙婷.乌拉坦诱导小鼠肺癌模型的研究[D].开封：河南大学,2013．

[5] 张晓,杨琼英,林国桢,等.大气污染与居民肺癌发病及死亡灰色关联分析[J].中国公共卫生2014,30(2)：165-170.

[6] Mantovani A, Allavena P, Sica A, et al.Cancer-related inflammation[J]. Nature,2008,454(7203)：436-444.

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[9] 刘璟,陈全,陈炎,等.ILK 对LPS诱导肺癌A549细胞分泌免疫逃逸相关因子的影响[J].免疫学杂志,2013,29(4)：291-295.

[责任编辑时红]

ThepromotiveeffectofLPSonUrethane-inducedlungcancerinmice

ZHANG Zhenzhen1，2, ZHENG Yaqiu1， DUAN Yongjian2， DU Gangjun

1.Intitute of Pharmacy, Pharmaceutical College of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China; 2.The First Affiliated Hospital of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

R734.2

A

1672-7606(2017)03-0164-03

2016-11-17

国家自然科学基金项目(81173094，81472745)

作者简介： 张真真(1988-)，女，河南周口人，在读研究生，研究方向：肿瘤早期诊断与综合治疗。