杜振华,姚静静，李自波，杜钢军

河南大学药学院 药物研究所，河南 开封 475004

当归赤小豆汤对乌拉坦诱导小鼠肺癌的预防作用

杜振华,姚静静，李自波，杜钢军

河南大学药学院 药物研究所，河南 开封 475004

〔目的〕 观察当归赤小豆汤对乌拉坦诱导的小鼠肺癌是否有预防作用。〔方法〕 采用乌拉坦腹腔注射建立小鼠肺癌模型，造模后随机分组。次日以当归赤小豆汤灌胃给药，观察其对肺癌小鼠体质量、自主活动及肺组织形态学的影响，并进行肺组织病理HE染色及血清CEA含量检测。〔结果〕 乌拉坦建立的小鼠肺癌模型组致瘤率为100%。当归赤小豆汤组致瘤率为78%。与模型组相比，当归赤小豆汤组小鼠肺荷瘤数较少且瘤体积较小。HE染色显示：模型组小鼠肺组织出现核畸变，炎症浸润明显；当归赤小豆汤组小鼠肺组织有明显的腺圈，腺圈内部有少量炎症浸润现象。血清肺癌标志物检测CEA表明，当归赤小豆汤组含量低于模型组(P<0.05)。〔结论〕当归赤小豆汤对乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型具有预防作用。

当归赤小豆；肺癌；预防作用

Abstract: 〔Objective〕To observe the prevention effect of Dangguichixiaodou decoction on lung cancer in mice.〔Methods〕The mouse model of lung cancer was established by injecting urethane into abdomen,they were divided into different groups randomly.The mice were received the Dangguichixiaodou decoction via intragastric administration next day following urethane injection.The body weight, autonomic activity and lung histomorphology were observed in mice. The lung pathological were observed by HE staining and the CEA content in the serum was detected.〔Results〕The tumorigenicity rate in the model group was 100%，whereas the tumorigenicity rate in the Dangguichixiaodou decoction group was 78%.Compared with the model group,the number of lung tumors was fewer, and the tumor volume was smaller . HE staining showed that the lung tissue in the model group appeared nuclear distortion and infiltration of inflammation. In the Dangguichixiaodou decoction group, the lung tissue had obvious gland ring, and there was a small amount of inflammatory infiltration in the gland. The CEA concentration in the Dangguichixiaodou decoction group was obviously lower than it in the model group (P<0.05). 〔Conclusion〕The Dangguichixiaodou decoction have prevention effect on lung cancer in mice.

Keywords: dangguichixiaodou decoction; lung cancer; prevention effect

肺癌是在癌症患者中发病率和死亡率最高的一种疾病[1]。 肺癌的治疗原则为多学科综合治疗和个体化治疗，现代医学常用治疗手段包括手术、放疗、化疗、免疫、分子靶向治疗等，但总体来说肺癌的预后取决于能否早期发现和及时治疗，故挖掘更有效的治疗方法属当务之急[2]。近年来，中医药治疗肺癌的研究方向主要体现在循证医学在中医药研究中的应用[3]。朴炳奎等[4]将肺癌辨证分为肺气不足、阴虚内热、气阴两虚、气滞血瘀和痰湿瘀阻证。 百病皆生于气，气血郁滞,从而导致血痊气血疲滞，为肿瘤的发生发展创造了条件，瘀滞贯穿于肿瘤的全病程是肿瘤的最主要病理变化[5]。所以，寻找一种能够化瘀的药物是治疗肺癌的关键。在《金匮要略》中赤小豆当归汤的功能主要是排脓血、除湿热。现代研究当归赤小豆用来治疗尿路感染、前列腺肥大、泡性结膜炎、白塞病综合征等[6]。基于以上观点，本实验开展了当归赤小豆对乌拉坦诱导的肺癌模型预防作用的研究。

1 实验材料

1.1 药品

1.1.1 当归赤小豆汤的制备 当归、赤小豆(购于开封市天济堂大药房)取当归20 g,赤小豆提取物80 g,加水熬煮3次，每次30 min，然后浓缩至200 mL,浓度为10 g/kg。

1.1.2 乌拉坦溶液 取乌拉坦6 g溶于100 mL体积分数为0.9%的生理盐水制成浓度为0.06 g/mL的溶液。

1.2 动物

昆明种小鼠：健康雌鼠，体质量(22±5) g，由河南省实验动物中心提供。

1.3 实验仪器

JY10001电子天平(上海精密科学仪器有限公司)；YLS-1A多功能小鼠自主活动仪(安徽淮北正华生物仪器有限公司)；FA224型电子天平(杭州汇尔仪器设备有限公司)；LGR16-W型高速冷冻离心机(北京京立离心机有限公司)；显微图像分析仪(奥林巴斯中国有限公司)；LEICA RM2235轮转切片机(徕卡显微系统上海贸易有限公司)。

2 动物实验

2.1 实验方法

2.1.1 建立小鼠肺癌模型 腹腔注射乌拉坦(600 mg/kg)建造肺癌模型，每周1次，连续注射10周。

2.1.2 分组与给药 将90只小鼠随机分成正常组、模型组、当归赤小豆汤组(以下称给药组)。给药组：当归赤小豆水煎液，从小鼠开始造模后次日按10 g/kg给药，2次/d，连续21周;模型组:小鼠造模后以0.2 mL/10 g蒸馏水灌胃2次/d,连续21周；正常组：正常的饲养。

2.2 指标检测

在小鼠养至第22周时，称量小鼠的体质量，测量自主活动。解剖取出肺部组织观察其肺部形态学变化。

2.3 病理检测

处死小鼠，取出肺组织称量计算脏器指数，然后放入体积分数为4%的多聚甲醛中48 h，常规梯度酒精脱水，二甲苯通透，石蜡包埋，切5 μm厚的片，HE染色，显微镜下观察并拍照。

2.4 生化指标检测

按照ELISA试剂盒说明书要求检测血清中CEA的浓度。

2.5 统计学处理

数据均以平均值±方差来表示，用SPSS 17.0处理，两组间差异性比较采用t检验。P<0.05表示有显著性差异；P<0.01表示有非常显著性差异。

3 结果

3.1 对小鼠形态学的影响

解剖小鼠，取出肺组织肉眼观察如下：正常组小鼠肺组织表面光滑，呈粉色，无充血、水肿的现象。模型组小鼠肺组织明显增大，呈现暗红色，部分组织略呈现淡黄色，并有明显的结节点。当归赤小豆组小鼠肺组织较正常组大小无明显变化，表面略见结节点，与模型组相比明显减少。见图1。

图1 小鼠肺组织形态比较

3.2 对小鼠肺组织病理影响

组织经过包埋切片HE染色结果如下图：正常组小鼠肺组织未见病理损伤；模型组小鼠肺组织出现核畸变，炎症浸润明显；当归赤小豆组小鼠肺组织有明显的腺圈，腺圈内部有少量炎症浸润现象。见图2。

3.3 生化指标检测

与正常小鼠比较，模型组血清CEA含量明显增高；当归赤小豆汤组与模型组比较，血清CEA显著降低。见图3。

图2 HE染色

图3 血清中CEA含量

3.4 对小鼠体质量、自主活动的影响

小鼠体质量模型组低于给药组及正常组；小鼠的自主活动模型组低于给药组及正常组。见图4、图5。

图4 小鼠的体质量比较

图5 小鼠的自主活动比较

4 讨论

当归，来源于伞形科多年生草本植物当归的干燥根。味甘、辛，性温。归肝、心、脾经。有补血、活血、调经、散寒、止痛之功效。赤小豆，来源于豆科植物赤小豆或赤豆的种子。味甘酸、性平。归心经、小肠经。在《金匮要略》中讲赤小豆渗湿清热、解毒排脓；当归活血、去瘀生血，浆水清凉解毒。二者共奏清热利湿，活血解毒之功。

乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型与临床人体肺癌发病过程十分相似，是目前常用的研究肺癌发病机制及肺癌预防的常用模型，一般采用给动物一次性腹腔注射乌拉坦制造模型[7]。可使小鼠肺癌发生率达到100%。在本实验中模型组小鼠出现畏寒、活动量少、体质量减轻的现象。第22周模型组解剖时发现小鼠肺部组织上均有黄白色结节，给药组解剖时发现小鼠肺部出现淡黄色结节。眼球取血时，模型组的血流量比给药组的少，血液黏度增高，生化指标检测CEA模型组明显高于正常组。HE染色发现，正常组小鼠肺组织未见病理损伤，模型组小鼠肺组织出现核畸变，炎症浸润明显，当归赤小豆组小鼠肺组织有明显的腺圈，腺圈内部有少量炎症浸润现象。

综上所述，病理检测结果及生化指标检测都表明，当归赤小豆汤对乌拉坦诱导的小鼠肺癌模型具有预防作用，可能与调节癌状态有关系。

[1] Jemal A, Bray F, Center M M, et al．Global cancer statistics[J]. C A. Cancer J Clin, 2011,61(2):69 -90.

[2] 容志航.北京市名老中医治疗肺癌的经验总结与临床研究[D].北京：北京中医药大学,2013.

[3] 关念波,刘浩,林洪生.肺癌中医药治疗的研究进展及展望[J].临床肿瘤学杂志,2013,18(3):264-267.

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[6] 李华英,段颖,刘士霞.赤小豆当归散加减治疗白塞病综合征的临床疗效观察[J].临床合理用药杂志,2016,9(4):58-59.

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[责任编辑时红]

ThepreventiveeffectofDangguichixiaodouDecoctiononurethane-inducedlungcancerinmice

DU Zhenhua，YAO Jingjing, LI Zibo, DU Gangjun

Intitute of Pharmacy, Pharmaceutical College of Henan University, Henan Kaifeng 475004, China

R734.2

A

1672-7606(2017)03-0153-03

2016-11-17

国家自然科学基金项目(81173094)

杜振华(1988-)，女，河南太康人，在读研究生，研究方向：中药药理学与肿瘤药理学。