范桂强，张李莉，蒋晓蕊，魏建良，郝江涛

(1.河北省衡水市食品药品检验检测中心，河北 衡水 053000；2.河北省深州市医院，河北 衡水 053800)

·中药工业·

HPLC法测定六味颈康胶囊中川续断皂苷VI的含量

范桂强1*，张李莉1，蒋晓蕊1，魏建良2，郝江涛2

(1.河北省衡水市食品药品检验检测中心，河北 衡水 053000；2.河北省深州市医院，河北 衡水 053800)

目的：建立高效液相色谱法测定六味颈康胶囊中川续断皂苷VI含量的方法。方法：色谱柱为ZORBAX SB-C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.1%盐酸水溶液(68∶32)；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；检测波长206 nm；进样量为20 μL。结果：川续断皂苷VI线性范围为0.0941～0.941 mg·mL-1(r=0.999 7)，平均加样回收率为97.79%，RSD为0.75%(n=6)。结论：该方法简便、准确、灵敏度高，结果可靠，重复性好，可有效控制六味颈康胶囊的产品质量。

六味颈康胶囊；含量测定；高效液相色谱法；川续断皂苷VI

六味颈康胶囊为河北省深州市医院制剂(冀药制字Z20051536)，由续断、白芍、甘草、醋乳香、醋没药和粉葛六味中药制成。该药具有活血、通络、止痛之功能，适用于气血瘀滞，经络痹阻引起的头疼头晕、颈项强直、脊背酸痛、四肢麻木的治疗。处方中续断为君药，其主要成分包括三萜及其苷类、环烯醚萜苷、生物碱、挥发油等化合物[1-2]，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏的功能[3]。本文以其三萜类皂苷中川续断皂苷VI进行定量研究，作为六味颈康胶囊的质量控制标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1100高效液相色谱仪、DAD检测器；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；XS205 DU电子分析天平[梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司]。

1.2 试药

对照品川续断皂苷VI(中国食品药品检定研究院，批号：111685-201506，含量：90.2%)；甲醇为色谱纯；水为纯化水；其他试剂均为分析纯。

续断(产地：四川凉州)、白芍、甘草、醋乳香、醋没药和粉葛药材(河北省深州市医院提供)，由河北省药品检验研究院专家鉴定为正品。六味颈康胶囊由河北省深州市医院制剂室提供(规格：0.4 g，批号分别为：141226、150713、151102)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

ZORBAX SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；检测器：二极管阵列检测器；以甲醇-0.1%盐酸水溶液(68∶32)为流动相；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为206 nm；柱温为30 ℃；进样量为20 μL。

2.2 对照品溶液的制备

2.2.1 对照储备液的制备 精密称取川续断皂苷VI对照品适量，置25 mL容量瓶中，用甲醇10 mL超声5 min，使溶解，并用流动相稀释至刻度，制成质量浓度为1.882 mg·mL-1的储备液。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密量取2.2.1项下对照品储备液3 mL，置10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20粒，精密称定，研细，称取约4粒量，精密加入70%甲醇25 mL，加热回流30 min，滤液蒸干，加水30 mL溶解，用乙醚振摇提取3次，每次25 mL，弃去乙醚液，用水饱和的正丁醇提取振摇3次，每次25 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25 mL，正丁醇液蒸干，用流动相定容至10 mL，摇匀，滤过。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方配制不含续断的阴性空白制剂，按照2.3项下方法处理，制成阴性对照溶液。

2.5 系统适用性试验

分别精密吸取2.2.2、2.3、2.4项下溶液，按2.1项下色谱条件进样，记录色谱图，结果见图1。

注：a.对照品溶液;b.样品溶液;c.阴性对照溶液;1.川续断皂苷VI。图1 液相色谱图

川续断皂苷VI的保留时间为7.69 min，与相邻杂质峰分离度均大于1.5，拖尾因子为0.97，峰形良好。阴性对照色谱图在主成分色谱峰位置处无干扰，理论塔板数按川续断皂苷VI计，不低于4800。

2.6 检测限及定量限

将川续断皂苷VI对照品色谱峰测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，分别以信噪比为3∶1及10∶1时注入液相色谱仪的量确定检测限与定量限，检测限为0.63 ng，定量限为2.10 ng。

2.7 线性关系考察

精密量取2.2.1项下对照品储备液各0.5、1、2、3、5 mL，分别置于10 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。各吸取20 μL分别注入液相色谱仪，测定。以峰面积(Y)为纵坐标，对照品浓度(X，mg·mL-1)为横坐标，绘制标准曲线并进行回归计算，得回归方程：Y=5845.84X+19.96，r=0.999 7。结果表明，川续断皂苷VI在0.094 1～0.941 0 mg·mL-1所测对照品的浓度与HPLC色谱峰面积存在良好的线性关系。

2.8 精密度试验

精密吸取2.2.2项下对照品溶液20 μL，按照2.1项下色谱条件连续测定6次，以峰面积计算，川续断皂苷VI的RSD为0.86%(n=6)，表明仪器精密度良好。

2.9 重复性试验

精密称取批号为151102的六味颈康胶囊细粉约4粒，共6份，按2.3项下的方法制备供试品溶液，测定其含量。川续断皂苷VI平均含量为1.686 mg/粒，RSD为0.98%(n=6)，表明重复性良好。

2.10 稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液，在0、2、4、6、8、12 h，按照2.1项下色谱条件分别进样20 μL，记录色谱图。结果得川续断皂苷VI峰面积的RSD为0.73%。表明供试液在12 h内稳定性良好。

2.11 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品(批号：151102，平均装量0.404 8 g)细粉适量(约为2粒)，加入对照品储备液(1.882 mg·mL-1)2 mL，按2.3制备供试品溶液，按2.1色谱条件进样20 μL，计算各组分平均回收率。见表1。

表1 加样回收试验(n=6)

结果表明，平均回收率均介于95%～105%，符合要求。

2.12 样品含量测定

取1.2项下3个批次的六味颈康胶囊，按2.3项下供试品的制备方法，按2.1项下色谱条件测定，用外标法计算川续断皂苷VI的含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(含量mg/粒，n=3)

3 讨论

3.1 定量分析目标的确定

六味颈康胶囊是河北省深州市医院经过多年临床经验积累研制的医院制剂，续断为君药，具活血化瘀、消肿止痛之功能，近年对续断化学成分研究[4]日益加深，现选取其主要成分川续断皂苷IV作为控制制剂质量的首选目标，根据《中华人民共和国药典》2015版规定[3]，川续断药材按干燥品计算，含川续断皂苷IV不得少于2.0%，依据六味颈康胶囊处方，建议含量标准定为不得低于1.26 mg/粒。

3.2 溶剂与提取方法的确定

比较了甲醇超声30 min[5]、乙腈超声30 min、50%乙醇水浴回流1 h等，发现本文采用的提取方法可有效去除杂质，基线平直，同时也能获得较大提取量，较其他方法提高10%以上。

3.3 检测波长的确定

利用DAD检测器，发现川续断皂苷VI在靠近200 nm处有较大吸收，由于190～200 nm处于紫外吸收末端，基线不稳，因而选择206 nm作为检测波长。

3.4 流动相的选择

实验过程中，采用甲醇-水、乙腈-0.05%磷酸水溶液、乙腈-水[5-6]等作为流动相进行洗脱，峰形对称性较差，采用甲醇-0.1%盐酸水溶液(68∶32)，与相邻杂质分离良好，色谱峰峰形对称，操作简便。

[1] 吴帅，刘二伟，张祎，等.川续断中化学成分的研究[J].天津中医药大学学报，2010，29(3)：147-150.

[2] 韦英杰，贾晓斌，樊宏伟，等.续断的色谱指纹及LC-ESI-MS分析[J].中国中药杂志，2011，36(2)：169-174.

[3] 国家药典委员会.中国人民共和国药典[S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[4] 王云华，刘继华，陈凡波，等.川续断中三萜皂苷类成分的研究概况[J].特产研究，2015(2)：74-78.

[5] 周平兰，余辉，蒋孟良，等.HPLC法测定跌打促愈片中川续断皂苷VI的含量[J].中国药师，2014，17(10)：1770-1772.

[6] 单秀明，王瑾，吴爱英.HPLC测定跌打片中川续断皂苷VI的含量[J].中国药师，2013，16(3)：388-390.

HPLCDeterminationofAsperosaponinVIinLiuweiJingkangCapsules

FANGuiqiang1*，ZHANGLili1，JIANGXiaorui1，WEIJianliang2，HAOJiangtao2

(1.HengshuiCentreforFoodandDrugControl，Hengshui，Hebei053000，China； 2.HebeiShenzhouHospital，Shengzhou，Hebei053800，China)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of asperosaponin VI in Liuwei Jingkang capsules.Methods：Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)column was used.The mobile phase was consisting of methanol and water containing 0.1% hydrochloric acid(68∶32)with a flow rate of 1.0ml·min-1.The column temperature was set at 30 ℃.The detection wavelength was 206 nm，and the injection volume was 20 μL.Results：There was a good linear relationship of asperosaponin VI，and peak area within the concentration range of 0.094 1-0.941 mg·ml-1(r=0.999 7).The average recovery was 97.79%(RSD=0.75%，n=6).Conclusion：The established method is accurate，highly sensitive and well reproducible，which can be used for the determination of asperosaponin VI in the Liuwei Jingkang capsules and the control of product quality.

Liuwei Jingkang Capsules；determination；HPLC；asperosaponin VI

] 范桂强，副主任药师，研究方向：食品、药品检验检测研究；E-mail：sagefan@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.2.022

2016-04-08)

*[