李杨 乔爱秀 徐云云 王晓晖 王丽 刘慧荣

基础研究

自噬下降对β1受体自身抗体诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用

李杨 乔爱秀 徐云云 王晓晖 王丽 刘慧荣

目的 探讨自噬下降对β1肾上腺素受体自身抗体（β1-AA）诱导的H9c2心肌细胞凋亡的作用。方法 使用1 μM的β1-AA对H9c2心肌细胞进行处理，Real time-PCR检测自噬相关基因LC3 mRNA表达的改变，Western blot检测LC3、Beclin 1以及P62蛋白表达水平的变化；使用流式细胞术、Caspase-3活性检测及Hoechst 33258染色反映细胞凋亡情况；使用经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）预处理30 min，以及mTOR通路抑制剂雷帕霉素（RAPA）预处理1 h后，再给予细胞β1-AA处理，检测此时细胞凋亡的变化情况。结果 与对照组相比，1 μM的β1-AA干预H9c2心肌细胞6 h可以明显降低细胞存活率［（83.46±12.87）%比（96.45±6.99）%］。与对照组（1.01±0.14）相比，β1-AA 干预细胞 6 h、12 h、24 h，LC3 mRNA水平依次降低［6 h（0.85±0.11），12 h（0.71±0.10），24 h（0.62±0.07）］，LC3Ⅱ和 Beclin 1 蛋白水平依次降低，P62蛋白水平逐渐增加，表明β1-AA可以引起心肌细胞自噬水平逐渐下降。同时发现，与对照组（1.13±0.24）相比，β1-AA干预细胞6 h、12 h，细胞凋亡水平明显升高，分别达到3.21±0.89和2.14±0.24。使用经典自噬抑制剂3-MA预处理心肌细胞30 min抑制自噬后，H9c2心肌细胞凋亡水平较β1-AA单独处理组显著增加［（41.45±6.37）%比（29.55±4.32）%］；而使用经典mTOR通路抑制剂RAPA预处理心肌细胞1 h上调自噬后，心肌细胞凋亡水平较β1-AA单独处理组明显下降［（17.36±2.98）%比（29.55±4.32）%］，说明自噬水平改变可以影响心肌细胞凋亡水平。结论 自噬下调能够增加β1-AA诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

自噬； β1肾上腺素受体自身抗体； H9c2； 凋亡

心功能不全是大多心血管疾病最主要的死亡原因之一[1]，其发病机制尚未完全阐明。大量动物实验和人体研究均发现，在心功能不全的过程中存在心肌细胞凋亡，而且心肌细胞凋亡在心功能不全的发生发展过程中起着至关重要的作用；……