张启全，周冬青，朱春玲，刘成永

江苏省徐州市传染病医院检验科，江苏徐州 221004

人类白细胞抗原G的表达与慢性乙型肝炎相关性研究

张启全，周冬青，朱春玲，刘成永

江苏省徐州市传染病医院检验科，江苏徐州 221004

目的 研究血清人类白细胞抗原-G（sHLA-G）水平与慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染的相关性及对乙型肝炎转归的影响。方法 收集2014年8月—2016年12月徐州市传染病医院就诊的100例慢性乙型肝炎病毒感染患者血清和临床资料,用Elisa法检测血清中HLA-G(sHLA G)水平,将测试结果结合临床资料和其他实验室结果,综合分析和判断的HLA-G(sHLA G)水平和相关的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染和乙型肝炎的影响结果。结果 100例样本中有31例为阳性，阳性率为31%.阳性患者中HBV DNA>107 5例，ADA阳性20例，肝肿瘤标志物AFP阳性6例。将检测结果结合患者临床资料进行统计学分析，HBeAg阳性组与HBeAg阴性组比较,HLA-G表达阳性率，采用χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。ALT异常患者与ALT正常患者，差异无统计学意义（P＞0.05）。HBV DNA阳性患者与HBV DNA阴性患者比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。HLA-G阳性患者中ADA阳性的有20例，与ADA阴性组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论HLA-G(sHLA G)水平和血清ALT,和免疫标记HBeAg没有相关性，与血清ADA和肝脏肿瘤标记物及肝损伤的程度和疾病的发展密切相关,它对判断疾病的发展具有重要意义。

人类白细胞抗原-G（HLA-G）；乙型肝炎病毒（HBV）；慢性乙型肝炎

人类白细胞抗原G基因属于人类白细胞抗原的非经典Ⅰ类基因，有研究表明病毒可促使HLA-G分子在机体内高表达[1]，乙型肝炎病毒是一种噬肝病毒，不同人感染HBV的表现不尽相同，分别表现为隐性、急性或急性重型、慢性，还有一些患者进一步发展为肝硬化和肝细胞癌，乙型肝炎病毒通过诱导机体表达HLA-G分子，借助其与受体结合的直接免疫和诱导HLA-G+ Treg发挥的间接免疫作用，有效地逃避了宿主的免疫攻击。为进一步明确人类白细胞抗原G的表达与乙型肝炎病毒感染的相关性及对疾病转归的影响，该研究方便收集了100例2014年8月—2016年12月徐州市传染病医院就诊的HBV感染患者血清样本,通过酶联免疫吸附试验（Elisa）方法检测患者血清中HLA-G水平，结合患者临床资料及其他实验室资料进行分析，进一步揭示HLA-G在HBV感染过程中的致病机制，同时也为乙肝的诊断、个体化治疗及预后评价提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取的100例样本血清及临床和其他临床实验室资料来源于徐州传染病医院就诊100例患者，所有患者临床诊断符合2010年 《传染病防治指南标准》[2]，其中表面抗原携带者10例，慢性乙型肝炎50例，慢性乙型肝炎合并戊型肝炎的重叠感染2例，肝硬化患者15例，肝癌患者23例，采用试剂盒中的标准品作为对照，并参考标准曲线作为质控。

1.2 方法

1.2.1 试剂及仪器 HLA-G检测试剂盒，酶标仪；肝功能检测采用全自动生化分析仪，试剂由上海高踪生物公司提供；乙型肝炎病毒两对半定量试剂，采用全自动免疫分析仪，荧光定量PCR仪，HBV DNA检测试剂。

1.2.2 操作方法

1.2.2.1 样本采集，患者空腹抽取血液10 mL，分别留取肝功能，两对半及HBV DNA检测样本及HLA-G检测样本。

1.2.2.2 酶联免疫法（Elisa）检测HLA-G取患者血液2 mL，离心后取血清作为待测样本。分别设置标准孔、空白孔、待测样品孔，严格按照说明书操作检测患者血清中的HLA-G水平，用酶标仪测定的OD值，来作为判断检测检测结果，以大于阳性对照的最低标准孔的值，判断为检测的阳性标本，将标准曲线作为质控标准。

1.2.2.3 其他检测，肝功能、两对半定量、HBV DNA荧光定量等操作严格按照说明书进行操作，并设有对照和质控标准。

1.3 统计方法

实验数据使用SPSS 16.0统计学软件进行统计学分析，采用例数（n）和百分比（%）表示计数资料，对率和构成比应用χ2检验进行比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HLA-G(Elisa)检测结果

100例样本中有31例为阳性，阳性率为31%，阳性患者中HBV DNA>1 075例，ADA阳性20例，肝肿瘤标志物AFP阳性6例。

2.2 结果分析

将检测结果结合患者临床资料进行统计学分析，HBeAg阳性组与HBeAg阴性组比较,HLA-G表达阳性率，采用χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.01）。ALT异常患者与ALT正常患者，差异无统计学意义（P＞0.01）。HBV DNA阳性患者与HBV DNA阴性患者比较，，差异有统计学意义（P＜0.05）。HLA-G阳性患者中ADA阳性的有20例，与ADA阴性组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）（见表1）。HLA-G阳性患者中有6例肝肿瘤标志物AFP阳性，另有5例慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA>107。

表1 慢性HBV感染患者血清HLA-G检测结果在ADA阳性组与ADA阴性组比较

3 讨论

100例样本中有31例患者HLA-G检测为阳性，31例阳性患者中HBV DNA>107 5例，ADA阳性20例，肝肿瘤标志物AFP阳性6例。HLA-G阳性患者中ADA阳性的有20例，与ADA阴性的比较，差异有统计学意义（P＜0.01）；HBV DNA阳性患者与HBV DNA阴性患者比较，差异有统计学意义（P＜0.05），另有6例肝癌患者肝肿瘤标志物AFP阳性。说明血清可溶性HLA-G（HLA-G）与肝功能中的ADA水平及慢性乙型肝炎病毒（HBV DNA）高载量，以及肝肿瘤标志物状况有一定的相关性。ALT异常患者与ALT正常患者，差异无统计学意义（P＞0.05），E抗原(+)患者与E抗原(-)比较,差异无统计学意义（P>0.05），说明与患者的血清可溶性HLAG（HLA-G）与患者ALT水平，以及血清免疫标志物HBeAg无相关性,F.J.D Souto等[3]在肝组织HLA-G表达与慢性乙型肝炎病毒感染的临床和组织病理关系一文，通过对免疫组织化学研究74例HBV感染者肝组织中HLA-G表达，有54例肝组织HLA-G出现阳性表达，研究结果表明HBV感染者肝组织中HLA-G表达与患者年龄、肝组织中HBsAg、HBeAg、HBcAg及肝组织纤维化程度和炎症活动度均没有相关性，而与患者HBV DNA含量相关，在HBV DNA>105肝组织中表达率较高；这与该次的研究结果基本一致，所不同的是该次的研究发现血清HLA-G表达在HBV DNA>107阳性率较高（31例阳性患者中HBV DNA>107 5例）。

在研究中还发现血清可溶性HLA-G（HLA-G）与肝功能中的ADA水平相关，目前相关报道尚不多见，35例ADA阳性的HBV感染患者有20例血清HLA-G阳性，且部分患者为病情较重的乙肝患者和乙、戊肝重叠感染，其血清中腺苷酸脱氨酶（ADA）阳性，与乙肝、乙、戊肝重叠感染造成的急性肝损伤有关，ADA是反映肝损伤的敏感指标，作为肝功能常规检查项目之一，与谷氨酸氨基转移酶等组成肝酶谱能较全面地反映肝脏病的酶学改变。如果是成倍的增高的情况的话，则说明肝脏损害严重，而与此同时患者血清中HLA-G检测也是阳性，进一步说明血清HLA-G分子水平与肝损伤程度相关。乙、戊肝重叠感染亦是慢性乙型肝炎加重的因素，这部分患者机体HLA-G分子水平较高，与HLA-G抑制了机体的免疫反应，加之两种病毒共同诱导机体表达HLA-G分子，血清中的HLA-G水平相对较高，反过来使病毒逃避了免疫监视和免疫攻击，使病毒不断入侵，对肝脏造成严重的损伤，因此下调乙肝患者机体的HLA-G分子水平，不但有利于清除病毒，还能避免患者发生戊肝重叠感染，具有重要的意义；由于HLA-G分子阳性高表达患者血清中ADA阳性占大多数，因此检测患者肝功能的ADA具有重要的意义，ADA阳性的乙肝患者HLA-G分子水平较高，对这部分患者采取增强免疫的疗法可能有助于抗病毒药物更好地清除乙肝病毒。

人类白细胞抗原G(HLA-G)是人类组织相容复合体抗原Ⅰ类基因，是一个免疫耐受分子，许多研究表明病毒可以促使HLA-G分子在体内高度表达[4-6]，该研究通过对100例乙肝患者血清中HLA-G分子表达研究中发现，HLA-G在5例HBV DNA含量大于107以上患者中出现高度表达，HBV DNA含量较低或者阴性患者表达水平相对较低，说明HLA-G抑制了机体的免疫反应，使病毒逃避了免疫监视和免疫攻击，从而使病毒不能够被有效清除，不断复制导致病毒载量不断增高,随着病毒含量增多又刺激机体产生大量的HLA-G分子,如此循环往复，使病毒难以清除,这与周林杰等[7]乙型肝炎病毒诱导HLA-G的表达与临床意义一文中认为HLA-G参与了调节了HBV病毒免疫逃逸的结论一致；因此，如果能够研究一种药物下调机体的HLA-G分子的表达或阻断HLA-G分子对免疫功能的影响，将这种药物配合核苷类似物一起发挥协同作用，将会缩短患者抗病毒治疗的疗程，提高抗病毒药物的效果，为患者抗病毒治疗提供一种辅助药物。

HLA-G分子不但在病毒感染中发挥其免疫抑制作用，而且在肿瘤免疫过程，抑制机体的免疫监视功能，许多研究表明HLA-G表达与卵巢癌、宫颈癌、肺癌、膀胱移动细胞癌等数许多种癌相关[8-11]，该次的研究还发现HLA-G分子在肝癌患者血清中出现高度表达，有学者研究认为肝癌患者约85%合并乙肝病毒（HBV）感染[12]，HBV感染使肝癌的发病率增加，该研究发现肝癌患者血清中HLA-G分子的表达高于其他患者和正常健康者，说明肝癌的发生与HLA-G分子的高度表达相关，因此检测患者血清中HLA-G的水平对于预测乙型肝炎进展、判断预后，早期干预以减少肝癌的发生具有一定的意义。

综上所述，血清HLA-G与肝功能中的ADA水平及慢性乙型肝炎病毒（HBV DNA）高载量，以及肝肿瘤标志物状况有一定的相关性;血清HLA-G是HBV持续感染的重要因素，在HBV感染所致的肝损伤过程中具有重要的作用，也是HBV感染引起肝肿瘤的促进因素。虽然HLA-G与乙型肝炎病毒感染有一定的相关性，但是乙型肝炎的致病机制受多方面的因素的影响，至今尚未完全明确，如能扩大样本含量，研究病毒和宿主的关系，对HBV和HLA-G表达进行进一步探讨，将有助于理解乙型肝炎的致病机制，为新的免疫疗法提供依据(通过下调HLA-G表达为HBV感染患者提供免疫治疗及减少肝癌的发生)。

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Research on Correlation between the Expression of Human Leucocyte Antigen G and Chronic Hepatitis B

ZHANG Qi-quan,ZHOU Dong-qing,ZHU Chun-ling,LIU Cheng-yong

Department of Clinical Laboratory,Xuzhou Infectious Disease Hospital,Xuzhou,Jiangsu Province,221004 China

ObjectiveTo research the correlation between the expression of human leucocyte antigen G and chronic hepatitis B and effect on the hepatitis B outcome.Methods100 cases of patients with chronic hepatitis B virus infection diagnosed in our hospital from August 2014 to December 2016 were selected and the HLA-G(sHLA G)in serum was tested by the Elisa method,and the testResultswere comprehensively analyzed and determined according to the clinical data and other laboratoryResults,and the correlation between the expression of human leucocyte antigen G and chronic hepatitis B and effect on the hepatitis B outcome were analyzed.ResultsOf the 100 patients,31 were positive and 31%positive.There were 5 5 patients with HBV DNA>10 patients with ADA positive and 6 patients with AFP positive for liver tumor markers. The positive rate of HLA-G expression in HBeAg positive group and HBeAg negative group was statistically significant(P> 0.05).The positive rate of HLA-G expression was not statistically significant(P>0.05).ALT abnormalities and normal ALT patients,the difference was not statistically significant(P>0.05).HBV DNA positive patients and HBV DNA negative patients,the difference was statistically significant(P<0.05).HLA-G positive patients with ADA positive in 20 cases,compared with ADA negative group,the difference was statistically significant(P<0.01).ConclusionThe HLA-G(sHLA G)level has no correlation with the serum ALT and immunolabelling HBeAg,but the serum ADA has a close correlation with the livertumor marker,liver injury degree and disease development,which is of important significance to determining the disease development.

Human leucocyte antigen G（HLA-G）;Hepatitis B virus（HBV）;Chronic hepatitis B

R4

A

1674-0742（2017）06（c）－0013-04

10.16662/j.cnki.1674-0742.2017.18.013

2017-03-22）

张启全（1981-），男，安徽濉溪人，本科，主管技师，主要从事临床医学检验和传染病研究工作。

周冬青（1970-），女，江苏徐州人，硕士，副主任技师，主要从事病理学技术和传染性疾病研究工作。