李钊政 万雷 乔荣勤 彭鹏豪 肖本浩 刘少津

1. 广州中医药大学，广东 广州 510405 2. 广州中医药大学附属骨伤科医院骨科，广东 广州 510240

骨质疏松症是困扰老年人身体健康的一大疾病，亦是世界性前沿研究难题。Wnt信号通路是与骨代谢相关的一个重要胞内信号传导通路，DKK1和Sost是Wnt信号通路的负调控因子，在骨形成过程中起重要作用，被视为骨相关疾病如骨质疏松、骨修复的治疗靶点[1]。近年来，有研究表明雌激素受体相关受体α(estrogen receptor-related receptor alpha，ERRα)与骨代谢的调节密切相关[2]。Auld 等[3]发现，ERRα通过抑制Wnt信号靶基因表达来调控成骨细胞分化，当成骨细胞中ERRα基因沉默后，可促进Wnt通路转导。而XCT-790是ERRα的特异性抑制剂[4]，可以显著降低成骨细胞的增殖能力和矿化能力[5]。本实验采用沉默DKK1、Sost腺病毒载体转染MG63细胞，并用ERRα抑制剂(XCT-790)干预转染的MG63细胞，应用Western blot检测MG63细胞中骨保护素(osteoprotegerin，OPG)、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)、成纤维生长因子2(fibroblast growth factor 2，FGF2)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNFα)蛋白的表达量，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和仪器

人成骨肉瘤细胞(MG63) 由中国科学院上海细胞所细胞库提供，DMEM培养基、胎牛血清、Pen/Strep和Opti-MEM培养基均购自美国Gibco公司；ERRα抑制剂(XCT-790)购自于Sigma公司；逆转录试剂盒、Lipofectamine 2000，TRIzol Reagent、Taq DNA聚合酶、荧光定量PCR试剂盒均购自美国Invitrogen 公司；质粒提取试剂盒、胶回收/纯化试剂盒购自北京天根生物有限公司；DH5α感受态细胞购自北京鼎国生物有限公司；BJ5183感受态细胞购自上海杰美基因公司；T4DNA连接酶、KpnⅠ、XhoⅠ、PmeⅠ、PacⅠ限制性内切酶购自美国NEB公司；抗Wnt信号通路抑制因子DKK1抗体购自美国CST公司；抗骨硬化蛋白(Sost) 抗体购自美国Abcam公司；……