梁晨晨，王立，罗秋玲，吴静



一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法

梁晨晨1,2，王立1,2，罗秋玲2，吴静1

1 江南大学药学院，江苏无锡 214122 2 江南大学食品科学与技术国家重点实验室，江苏无锡 214122

梁晨晨,王立, 罗秋玲, 等. 一种增加毕赤酵母生产胰岛素前体的方法. 生物工程学报, 2017, 33(7): 1178–1189.Liang CC, Wang L, Luo QL, et al. A method to increase the production of insulin precursor in Pichia pastoris. Chin J Biotech, 2017, 33(7): 1178–1189.

为了提高胰岛素前体 (PI) 的产量，构建了pPIC9K-PI表达载体并电转化至毕赤酵母菌株GS115中，在浓度为4.0 mg/mL的G418抗性平板上筛选到了1株拷贝数为12的菌株CL012。将SNAREs (可溶性N-乙基马来酰亚胺敏感因子受体蛋白) 组分中的SNC2和SNC2-SSO2分别转入菌株CL012中，并在摇瓶和5 L发酵罐水平上检测SNAREs对PI产量的影响。结果表明：摇瓶水平上，甲醇诱导96 h后，菌株CL012的PI产量为1.53 mg/L；表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别为1.89 mg/L和2.21 mg/L，分别比菌株CL012提高了23.53%和44.44%。在5 L发酵罐上进行高密度发酵，甲醇诱导96 h后菌株CL012的PI产量为53 mg/L，是摇瓶水平的34.64倍；表达SNC2和SNC2-SSO2的菌株的PI产量分别达到64 mg/L和78 mg/L，分别比菌株CL012提高了20.75%和47.17%。由此得出结论SNAREs可以促进胰岛素前体的分泌，从而提高在毕赤酵母中的异源表达。

毕赤酵母，胰岛素前体，SNAREs，异源表达

作为重要蛋白表达宿主，毕赤酵母广泛应用于不同来源 (人、动物、植物、真菌和病毒) 和不同类型(分泌型和非分泌型) 重组蛋白的高效生产[1-2]。但是，并不是所有的重组蛋白都能有效地分泌，这是因为重组蛋白的高水平表达面临着基因剂量[3]、mRNA的转录水平、蛋白质在内质网中的加工折叠[4]以及在胞质中的运输等诸多制约其产量的关键瓶颈。其中，重组蛋白的分泌运输是制约其高效生产的关键因素之一。……