骆爱玲，杜春园，赵雪梅，梁继超，陈勇



miR-29b2c重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响

骆爱玲，杜春园，赵雪梅，梁继超，陈勇

湖北大学中药生物技术省重点实验室生物资源绿色转化湖北省协同创新中心，湖北武汉 430062

骆爱玲, 杜春园, 赵雪梅, 等. miR-29b2c重组腺病毒的构建及对胃癌细胞增殖和迁移的影响. 生物工程学报, 2017, 33(7): 1136–1144.Luo AL, Du CY, Zhao XM, et al. Effects of recombinant adenovirus Ad-miR-29b2c on HGC-27 cell proliferation and migration. Chin J Biotech, 2017, 33(7): 1136–1144.

构建了miR-29b2c重组腺病毒Ad-miR-29b2c，考察了其对HGC-27、MGC-803胃癌细胞增殖及迁移的抑制作用。采用PCR从基因组扩增miR-29b2c片段，并克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中，构建穿梭质粒pAdT-29b2c，经酶切及测序鉴定。穿梭质粒经Ⅰ线性化后与腺病毒骨架载体共转化BJ5183感受态，产生重组腺病毒质粒Ad-miR-29b2c，再经Ⅰ线性化后转染293A细胞进行包装。重组腺病毒扩增后感染HGC-27细胞，通过MTT及细胞迁移实验观察Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞增殖及迁移的影响。采用Western blotting检测Ad-miR-29b2c对HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达的影响。酶切、测序及荧光定量PCR结果表明重组腺病毒构建成功，miR-29b及miR-29c在HGC-27细胞过表达。MTT实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞增殖。细胞迁移实验表明Ad-miR-29b2c能显著抑制HGC-27、MGC-803细胞迁移。此外，Ad-miR-29b2c能显著降低HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达水平。综上所述，构建了miR-29b2c的重组腺病毒，并发现其可以抑制胃癌细胞HGC-27和MGC-803的增殖及迁移，该作用可能与miR-29抑制HGC-27、MGC-803细胞δ-catenin蛋白表达有关。

miR-29，胃癌，重组腺病毒，基因治疗

胃癌是一种发病率及死亡率极高的恶性肿瘤，每年约90万人被诊断为胃癌，约70万人死于胃癌[1]。目前对于胃癌的治疗以手术为主，但无论是早期还是中晚期胃癌均存在术后复发的情况，寻找有效的早期诊断指标及治疗标靶是胃癌处理中的一个难题。……