潘剑茹，陈莉娟，何火聪，苏颖，王香玲，李娴，陈翠煌，吴伦巧，刘树滔



全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应

潘剑茹1，陈莉娟1，何火聪2，苏颖2，王香玲1，李娴1，陈翠煌1，吴伦巧1，刘树滔1

1 福州大学生物科学与工程学院，福建福州 350108 2 福建省科技厅转化医学重点实验室福建医科大学附属肿瘤医院福建省肿瘤医院放射生物学及肿瘤放射治疗学研究室，福建福州 350014

潘剑茹, 陈莉娟, 何火聪, 等. 全长SOD2重组蛋白的可溶表达、纯化、稳定性与跨膜效应. 生物工程学报, 2017, 33(7): 1168–1177.Pan JR, Chen LJ, He HC, et al. Expression, purification, stability and transduction efficiency of full-length SOD2 recombinant proteins. Chin J Biotech, 2017, 33(7): 1168–1177.

超氧化物歧化酶(SOD) 家族是保护细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧 (ROS) 毒性所必需的，含Mn2+离子的超氧化物歧化酶 (Mn-SOD，SOD2) 是其中最重要的一种。本研究合成了人源SOD2全基因序列，并将其插入带有GST的原核表达载体pGEX-4T-1中，成功构建了GST-SOD2融合蛋白表达质粒。然后，将重组质粒pGEX-4T-1-SOD2转化大肠杆菌BL21 (DE3)，用IPTG在25 ℃下诱导表达融合蛋白，得到可溶性GST-SOD2融合蛋白，经GST亲和树脂纯化得到比活为1 788 U/mg的纯蛋白，分子量约为46 kDa。利用凝血酶切去GST标签后经肝素亲和柱纯化得到了电泳纯的SOD2重组蛋白，该蛋白分子量约为25 kDa，与SOD2全长序列的理论分子量相符，比活为2 000 U/mg。两种重组SOD2蛋白在生理条件下都具有良好的SOD活性，且都具有显著的跨膜能力 (<0.05)。这些工作为深入研究两种全长重组SOD2蛋白的结构与生物效应建立了基础。

Mn超氧化物歧化酶，构建，融合蛋白，表达纯化，稳定性，跨膜效应

超氧化物歧化酶 (SOD) 家族是保护氧利用细胞免受正常代谢过程中产生的活性氧 (ROS) 毒性所必需的。除了保护性蛋白质，这些酶也是调节细胞生理学信号通路的关键组件。……