李艳婷，侯喜林



牛呼吸道合胞体病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

李艳婷，侯喜林

目的 建立牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法。方法 以重组纯化的BRSV-G蛋白免疫家兔和小鼠，制备抗G蛋白的多克隆抗体(PcAb)和单克隆抗体(MAb)，方阵滴定法优化DAS-ELISA方法抗体工作浓度及反应条件，并对其敏感性、特异性、符合率进行验证。结果 获得5株稳定分泌抗G蛋白MAb的杂交瘤细胞株，分泌抗体亚类均为IgG1型κ链，Western blot、IFA试验表明PcAb和MAb均与G蛋白和BRSV发生特异性反应，MAb作为捕获抗体的最佳包被浓度为2.5 μg/mL，PcAb作为检测抗体最佳工作浓度为5 μg/mL，判定临界值为0.22，最低检测限为1.43 μg/mL，批内和批间重复性试验变异系数均小于10%，与常引起牛呼吸道疾病的几种病原均无交叉反应，与RT-PCR的敏感性、特异性、符合率分别为92.0%、100%、95.6%。结论 建立的检测BRSV的DAS-ELISA方法可用于临床样品的大规模检测,为BRSV疫情的监测和快速诊断奠定了基础。

牛呼吸道合胞体病毒；G蛋白；多克隆抗体；单克隆抗体；DAS-ELISA

牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus,BRSV)是引起犊牛呼吸道疾病的主要病原[1]。BRSV感染引起犊牛的高发病率和高死亡率，给养牛业造成了巨大的经济损失[2]。自2007年王红等[3]首次从黑龙江省某牛场成功分离出牛呼吸道合胞体病毒以来，之后我国多个省份陆续报道检出BRSV病毒[4]，证明BRSV病毒已在我国普遍存在。牛是BRSV的天然宿主且感染率非常高，牛群中血清阳性率可达30%～70%，BRSV感染可引起60%～80%的发病率，20%的死亡率[5]。随着我国集约化的养殖，需不断从国外进口优质犊牛，而我国尚未将BRSV列入检疫范围[6]，有可能从有该病国家引进带毒的牛，严重制约我国养牛业的发展，因此建立有效地检测方法对于我国BRSV感染的快速诊断和科学防治具有重要意义。……