黄磊，董自星，金鹏，王正祥，路福平*

1(天津科技大学 生物工程学院，工业发酵微生物教育部重点实验室，天津，300457)2(天津科技大学 化工与材料学院，生物化工系，天津，300457)

地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶嗜碱突变体的特征分析

黄磊1，董自星2*，金鹏2，王正祥2，路福平1*

1(天津科技大学 生物工程学院，工业发酵微生物教育部重点实验室，天津，300457)2(天津科技大学 化工与材料学院，生物化工系，天津，300457)

地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶是工业上重要的蛋白酶类，进一步提高其在碱性条件下的活力可改善其在洗涤剂工业方面的应用价值。该研究通过筛选获得一种在碱性条件下酶活水平显著提高的地衣芽胞杆菌B186来源的蛋白酶，并在枯草芽胞杆菌WB600中对其编码基因进行了成功克隆与表达，获得了重组菌WB600 (pHY-E209)。然后通过离子交换色谱和凝胶层析法，从重组菌的发酵液中纯化获得了重组碱性蛋白酶AprE209。对酶学性质的研究表明，重组酶AprE209的最适作用pH为11.0，最适作用温度为50 ℃，在30～37 ℃下和pH 12.0时仍具有很高的活力。进一步通过生物信息学的手段对其耐碱机制进行了初步解析。该嗜碱突变体具有进一步用于洗涤剂的潜在研究价值。

蛋白酶；嗜碱性突变体；洗涤剂行业；酶学特征

碱性蛋白酶是指在pH偏碱性范围内水解蛋白质肽键的一大酶类，是工业酶制剂中使用量最大的酶制剂之一，它在皮革、造纸、洗涤、化妆品、动物饲料等领域具有重要应用[1]。地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶是工业上重要的蛋白酶，其中最具代表性的是地衣芽胞杆菌2709生产菌株生产的碱性蛋白酶(2709碱性蛋白酶)，它是我国最重要的碱性蛋白酶来源[2]。……