瞿印权 徐雯 沈露 何天友++魏建文 荣俊冬 郑郁善

摘要：以大头典竹叶片为材料，采用单因素分析法和正交设计直观分析法，对影响PCR扩增效果的Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶、引物、模板DNA含量这5个PCR反应体系主要成分以及退火温度和循环次数进行筛选。通过研究建立了适合大头典竹的ISSR-PCR反应体系：20 μL反应液中含2.5 mmol/L Mg2+，0.25 mmol/L dNTPs，1.25 U TaqDNA聚合酶，0.6 μmol/L引物，10 ng模板DNA，2 μL 10×Buffer，10.55 μL ddH2O。相应反应程序为94 ℃预变性 5 min；94 ℃ 变性45 s，54.5 ℃退火30 s，72 ℃延伸90 s，35个循环；72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。应用建立的优化反应体系成功地筛选出16条多态性较高的引物，表明该体系具有较高稳定性、重现性、适用性，可较好地应用于大头典竹不同地理种源间的遗传多样性研究。

关键词：大头典竹；ISSR；反应体系；优化

中图分类号： S795.901文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2017）10-0034-06

地球上的竹类植物共有88属1 400多种，主要分布在亚太区、美洲区、非洲区[1]。中国竹类主要分布于长江中下游，其中以福建、浙江、江西、湖南4省最多，占全国竹林面积的60.7%[2]。大头典竹[Dendrocalamopsis beecheyana var. pubescens （P. F. Li） Keng f.]属于竹亚科（Bambusoideae）绿竹属[Dendrocalamopsis （Chia et H. L. Fung） Keng f.]的丛生竹，别称新竹、荣竹，具有繁殖生长快、根系发达、适应性广等特点。目前，在我国关于大头典竹在分子生物方面的研究较少。[JP]

近年来，随着现代分子生物学的快速发展，分子标记技术被广泛应用于遗传多样性以及指纹图谱构建的研究[3-5]。目前应用最为广泛的分子标记技术主要有RFLP、RAPD、AFLP、ISSR、SRAP等[6]。其中SSR序列广泛分布在高等生物的染色体上，因此利用该简单重复序列标记（inter simple sequence repeat，ISSR）技术可以获得较多的分子标记。ISSR的引物长度较RAPD引物长，因此ISSR具有重现性的特点，可以获得较可靠的遗传多样性信息，有利于植物种间及种内的鉴别[7]。……