王志芳， 刘 岩 ，肖 丽，孟祥玲，赵恩锋 ，李胜水

1.河北省沧州中西医结合医院血液肿瘤科 (沧州 061000 ),2.河北省沧州中西医结合医院病理科 (沧州 061000 )

FOXP1与Livin在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及临床意义*

王志芳1， 刘 岩2，肖 丽1，孟祥玲1，赵恩锋1，李胜水2

1.河北省沧州中西医结合医院血液肿瘤科 (沧州 061000 ),2.河北省沧州中西医结合医院病理科 (沧州 061000 )

目的：探讨FOXP1、Livin在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的表达及相关性。方法：选取经病理确诊的DLBCL患者76例作为观察组，以反应性淋巴结增生患者42例作为对照组。观察组中根据不同指标分组：低危组36例和高危组40例；Non-GCB组41例和GCB组35例；结内组43例和结外组33例；无B症状组45例和有B症状组31例。每组均检测FOXP1和Livin的表达及二者的相关性。结果：观察组中Livin、FOXPI表达均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；Livin 、FOXPI在高危组、Non-GCB组高表达患者较多，和对应的低危组、GCB组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；Livin在有B症状组高表达患者较多，和无症状组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；Livin 、FOXPI在Non-GCB型DLBCL中呈正相关。结论：FOXP1、Livin在DLBCL中均有高表达，且和DLBCL的原发部位、IPI评分、病理类型等有关；其有望成为判断DLBCL预后的指标。

弥漫大B细胞淋巴瘤(Diffuse large B-cell lymphoma, DLBCL)属于非霍奇金淋巴瘤中的一种疾病，在B细胞淋巴瘤中占约40%，恶性程度较高，异质性明显[1]。因此，为判断其预后，寻找新的生物学指标非常有必要。叉头框蛋白P1(Forkhead box p1，FOXP1)属于FOXP亚家族中的转录因子成员，并具有多种生物学功能。具研究显示[2]，其能促进或抑制肿瘤的发生和发展，但FOXP1的预后仍有争论。Livin基因属于凋亡抑制蛋白家族中成员，已有研究证实，Livin在DLBCL中高表达提示患者预后不良。为了给DLBCL的预后判定提供科学依据，本研究设计了FOXP1、Livin在DLBCL表达中的关系研究。现报告如下。

资料与方法

1 一般资料 选取2001-2016年本院收治的并经过病理确诊的弥漫大B细胞淋巴瘤患者76例作为观察组，以反应性淋巴结增生患者42例作为对照组。观察组男40例，女36例，年龄平均(38.9±3.7)岁；对照组中男23例，女19例，年龄25～75岁，平均(37.9±4.7)岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。观察组中根据不同指标分组：根据IPI评分分为低危组(0～2分)36例和高危组(3～5分)40例；根据病理类型分为non-GCB组41例和GCB组35例；根据原发部位分为结内组43例和结外组33例；根据B症状有无分为无B症状组45例和有B症状组31例。观察组各组间经统计学分析性别、年龄等一般资料方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

入选标准： ①所有病例均根据实验室检查、临床表现、及病理学检查等符合DLBCL的诊断标准。②初次确诊在本院治疗，且用相同化疗方案。③自愿接受免疫组织学检查，临床资料完整。排除标准： ①严重肝、肾、心等严重功能不全者；②有急性感染、其他部位有恶性肿瘤等不适合参与研究的患者。

2 研究方法 检侧标本取得后，用10%甲醛(中性)溶液固定，切片用石蜡包埋，厚度约3～4μm。烘烤2h，置恒温箱(60℃)中24h，然后脱蜡(用二甲苯)、脱水(用梯度乙醇)、修复(用枸橼酸修复液，进行高压修复2min)。用H2O2(浓度3%)阻断内源性的过氧化氢酶，PBS处理，加封闭用羊血清，进行一抗孵育(FOXP1多克隆抗体、Livin多克隆抗体均由武汉博士德生物公司提供)，置于冰箱中(4℃)过夜、复温(37℃恒温箱中)、冲洗(用PBS冲洗。时间5min)。二抗孵育(用50μl生物素处理)，置于恒温箱(37℃)中孵育10min，经PBS冲洗3次后，用链霉素抗生物素-过氧化物的酶溶液(50μl)，恒温箱中孵育约20min，冲洗3次。之后，在切片中加入DAB溶液2滴，放入显微镜下观察，阳性显色棕黄色或棕褐色。自来水冲洗，后复染、透明、封片。定位用低倍显微镜观察，然后用高倍显微镜观察。

3 结果判定 200倍光镜下，随机选5～10个视野，癌细胞计数100～200个，FOXP1和Livin表达用二级计分法进行分析；染色强度有4个等级：无染色表示0分，浅黄色表示1分，黄色表示2分，棕黄色和棕褐色表示3分；阳性细胞百分率表示: 阳性细胞≤5% 表示0分，6%～25% 表示1分，26%～50% 表示2分，>50% 表示3分；表达情况用二者乘积: 0分表示(-)，1～4表示(+)，5～8表示中度阳性() ，9～12表示强阳性() ; 为便于临床统计分析，(-)和(+)归于低表达，()和()归于高表达。

4 观察指标 分析对照组及观察组Livin、FOXPI的表达情况；分析观察组各组中Livin、FOXPI的表达情况；分析在DLBCL中Livin、FOXPI高表达的相关性。

5 统计学方法 应用SPSS17.0统计软件处理，率的比较采用χ2检验，两变量间的相关性采用Spearman检验，P<0.05为有统计学意义。

结 果

1 对照组及观察组Livin 、FOXPI的表达情况 观察组中Livin 高表达60.53%，FOXPI高表达76.32%，均分别高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 两组Livin 、FOXPI的表达情况[例(%)]

2 观察组中各组Livin 、FOXPI的表达情况 Livin 、FOXPI在高危组、Non-GCB组高表达患者较多，和对应的低危组、GCB组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；Livin在有B症状组高表达患者较多，和无症状组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 观察组各组Livin 、FOXPI的表达情况[例(%)]

注：与对应组比较，*P<0.05

3 Livin、FOXPI的表达相关性 在76例DLBCL标本中有40例DLBCL患者(均属于Non-GCB型)同时存在FOXP1和Livin高表达。Spearman检验可知，40例non-GCB型DLBCL组织切片中FOXP1和Livin高表达呈正相关(r=0.825,P<0.05)，见表3。

表3 Livin 、FOXPI的表达在non-GCB型DLBCL中的相关性(例)

讨 论

弥漫性大B细胞瘤进展迅速[3]，侵袭性较强，预后较差。FOXP1是FOX家族中成员，能够参与多种人体正常生理过程[4]。胡成如[5]报道，FOXP1表达和恶性肿瘤临床特点及预后密切相关。Livin 为凋亡抑制蛋白家族中成员，主要通过对蛋白酶、信号传导的抑制来抵抗细胞凋亡。王锋刚[6]研究显示，Livin在很多肿瘤患者中，呈现较高的表达。这可能是因为Livin 正常的凋亡机制受到损伤，使恶性潜能积累，发生肿瘤。

本研究结果显示，FOXP1、Livin 在DLBCL中的表达与反应性淋巴结增生中的FOXP1、Livin比较，明显升高(P<0.05)，此结果和张亚楠[7]的研究一致。本研究还显示，FOXP1、Livin在DLBCL的高危组、有B症状组、Non-GCB组有较高的表达，提示FOXP1、Livin和DLBCL临床病理特征有关。和夏靖媛[8]的研究结果相似。本研究中FOXP1在DLBCL中B症状的有无方面差异无统计学意义，而Livin在B症状有无方面差异有统计学意义。FOXP1高表达提示肿瘤细胞有免疫逃逸现象，Livin 高表达则说明细胞凋亡机制出现障碍。FOXP1和Livin的表达在Non-GCB型DLBCL中呈正相关。这可能是因为FOXP1参与了NF-κB信号通路活化，在转录水平上FOXP1高表达能够使抗凋亡基因Livin的表达上调，使AKT途径被激活，另外Livin也能通过其他抗凋亡途径参与抗凋亡活动，从而使肿瘤细胞逃逸凋亡。因此检测FOXP1、Livin表达可能评估肿瘤预后。

综上所述，FOXP1、Livin在DLBCL中均有高表达，且和DLBCL病理类型及临床特征有关；FOXP1和Livin表达在Non-GCB型DLBCL中呈正相关。提示二者有望成为判断DLBCL预后的指标。

[1] 胡成如,王靖华. 弥漫大B细胞淋巴瘤相关预后因素的研究进展[J].医学研究生学报,2010, 23(10): 1098-1103.

[2] 胡成如,王靖华.FOXP1在肿瘤发生和发展中的作用[J].临床肿瘤学杂志,2011, 16(11): 1052-1055.

[3] 曹 斌,张 曙,章建国,等.乳腺癌中Livin和PTEN蛋白表达与预后的相关性研究[J].现代肿瘤医学,2012, 20(5):967-970.

[4] 赵 茜,侯 健.弥漫大B细胞淋巴瘤预后相关因素研究进展[J].肿瘤防治研究,2013, 40(6): 514-515.

[5] 胡成如,王靖华,耿怀成,等.叉头框转录蛋白1在弥漫大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义[J].临床肿瘤学杂志, 2012, 17(4): 339-342.

[6] 王锋刚，王天昶，昊 磊，等.淋巴结转移对鼻咽癌预后的研究在[J].陕西医学杂志，2016,45(4)：474-475.

[7] 张亚楠，刘汉锋.FOXP1蛋白在弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及预后意义[J].重庆医学，2015,44(6)：2368-2370.

[8] 夏靖媛，徐 薪.FOXP1与Livin 基因表达对淋巴瘤病理特征及临床预后评价价值[J].武警医学，2016,27(12)：1237-1238.

(收稿：2017-02-03)

The relationship and clinical significance of FOXP1 and Livin two expression in diffuse large B cell lymphoma

Wang Zhifang,Liu Yan, Xiao Li,et al.

Department of Hematology and Oncology,Cangzhou Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine in Hebei Province(Cangzhou 061000)

Objective:To investigate the expression and correlation of FOXP1 and Livin in diffuse large B cell lymphoma (DLBCL).Methods: 76 cases of DLBCL diagnosed by pathology were selected as observation group,42 cases of reactive lymph node hyperplasia were used as control group.The observation group was grouped according to different indexes: Low risk group 36 cases and high risk group of 40 cases;Group non-GCB 41 cases and GCB group of 35 cases;There were 43 cases in the intra node group and the other in the extranodal group (n=33);There were no B symptoms in 45 cases and 31 cases of B symptom group.The expression of FOXP1 and livin were detected in each group and the correlation between the two groups. Results:The expression of Livin and foxpi in the observation group were significantly higher than those in the control group,the difference was statistically significant(P<0.05);Livin, FOXPI in high-risk group,non-GCB group of patients with high expression was more,They were compared with the corresponding low risk group,GCB group(P<0.05);Livin was higher in patients with B symptoms,compared with asymptomatic group(P<0.05);Livin,FOXPI was positively correlated with type DLBCL non-GCB .Conclusion:FOXP1 and Livin have high expression in DLBCL,It is related to the primary site of DLBCL,IPI score,pathological type and so on;It is expected to be a prognostic indicator for DLBCL.

Lymphoma,large B cell Diffuse livin/Pathology @Apoptosis-inhibitory protein F-box proteins/analysis Prognosis

*河北省沧州市科技计划项目(151302180)

淋巴瘤,大B细胞弥漫性/病理学 @凋亡抑制蛋白 F-框蛋白质类/分析 预后

R363

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.053