吴超+朱卫丰+嵇琴+周莹+章明+黄鑫+彭淑红

[摘要] 探讨女贞子对大鼠肝脏细胞色素c氧化酶（cytochrome c oxidase，COX）活性的影响及可能的DNA甲基化机制。实验采用女贞子的水提物按2.0 g·kg^-1和6.0 g·kg^-1灌胃大鼠30 d，处死大鼠后，取肝脏测定COX活性、COX的亚基之一COX4I1蛋白浓度、测定Cox4i1，Dnmt3a，Tet1基因mRNA表达水平、TET1和DNMT3A的蛋白水平以及检测Cox4i1DNA甲基化频率。结果显示女贞子低剂量和高剂量能显著性升高COX的活性和COX4I1的浓度（P<0.05）；有降低TET1蛋白和DNMT3A的蛋白表达量的趋势；但未显著改变Cox4i1，Dnmt3a，Tet1基因mRNA表达。与空白对照组相比，女贞子高剂量组甲基化频率有降低的趋势但未达到显著水平。该研究表明：女贞子对大鼠肝脏的COX酶活性有促进作用，其可能通过促进COX4I1的蛋白量增加实现；女贞子对DNMT3A的蛋白表达有降低趋势，其可能是Cox4i1DNA甲基化频率有降低趋势的原因。女贞子对于DNMT3A和TET1的蛋白表达可能有同向调节作用，具体机制仍不明确。

[关键词] 女贞子； 能量代谢； COX4； COX4I1； DNMT3A； TET1

[Abstract] The study aims to investigate the effect of Ligustri Lucidi Fructus on cytochrome c oxidase（COX） activity in rat hepatic tissues and explore its possible mechanism of DNA methylation. Male SD rats received aqueous extract of Ligustri Lucidi Fructus （2.0，6.0 g·kg^-1） by intragastric administration for 30 d. After the rats were sacrificed， hepatic tissues of rats were taken to detect COX activity， protein concentration of COX4I1， TET1 and DNMT3A protein levels， mRNA expression levels of Cox4i1， Dnmt3a and Tet1， and determine the DNA methylation frequency of Cox4i1.Results showed that both low and high doses of Ligustri Lucidi Fructus could significantly increase COX activity and concentration of COX4I1（P<0.05）， with a decreasing tendency of both TET1 protein and DNMT3a protein expression； however， mRNA expression levels of Cox4i1， Dnmt3a and Tet1 were not significantly changed by Ligustri Lucidi Fructus. In addition， DNA methylation frequency of Cox4i1 in high dose group showed a declining tendency as compared with the blank control group， but without significant difference.These results indicated that Ligustri Lucidi Fructus had promotive effect on hepatic COX activity in rats， which may be achieved by increasing protein content of COX4I1. Moreover， a decreased tendency of DNMT3A protein could be one of the reasons for the lower trend of Cox4i1 methylation rate. In addition， Ligustri Lucidi Fructus may regulate the expression levels of DNMT3A and TET1 in the same direction and its mechanism is not clear.

[Key words] Ligustri Lucidi Fructus； energy metabolism； COX4； COX4I1； DNMT3A； TET1

女貞子为木犀科植物女贞Ligustum lucidum的干燥成熟果实，其性凉，《本草纲目》记载其具有养阴气，平肝火的作用。很多研究结果都表明寒凉药有抑制能量代谢的作用[1-3]。线粒体氧化磷酸化是机体能量ATP生成的主要方式之一，而细胞色素c氧化酶（cytochrome c oxidase，COX）是线粒体呼吸链的末端组分，也是氧化磷酸化的重要组成部分。DNA甲基化是新兴学科——表观遗传学的重要研究内容，是目前研究最为深入的一种表观遗传修饰机制，也是调控基因表达的一种重要的修饰方式。本文首先探讨了女贞子对大鼠肝脏COX的活性以及其重要调节亚基COX4I1蛋白量的影响，然后从DNA甲基化角度探索女贞子对DNA甲基化转移酶和去甲基化酶的转录水平和蛋白水平的影响，并研究了COX调节亚基基因Cox4i1的DNA甲基化水平以及mRNA水平，以期从DNA甲基化水平探讨女贞子干预COX酶活性的机制。

1 材料

1.1 药物及试剂

女贞子购自江西樟树天齐堂中药饮片有限公司，产品批号1307007，产于江西，经江西中医药大学邓可众副教授鉴定。细胞色素c氧化酶活性测定试剂盒（GENMED，批号11-42413-12）；……