李红侠，刘崇东，曹广明，娄 彤，张震宇*

(1.民航总医院 妇产科，北京100123；2.首都医科大学附属北京朝阳医院 妇产科，北京100020)

scFv-RBP4融合蛋白的构建

李红侠1，刘崇东2，曹广明2，娄 彤2，张震宇2*

(1.民航总医院 妇产科，北京100123；2.首都医科大学附属北京朝阳医院 妇产科，北京100020)

目的 构建scFv-RBP4融合蛋白。方法 采用德泰生物最新开发的密码子优化软件MaxCodonTM Optimization Program (V13)对提供的scFv- RBP4蛋白氨基酸序列进行优化，设计全长拼接引物，通过双酶切法将scFv- RBP4基因插入到表达载体proEM中，并通过酶切法和测序确认最终表达载体的准确性，最终转到DH5a克隆菌株中，通过质粒大抽试剂盒提取转染级质粒，之后将质粒通过转染试剂转染到哺乳动物细胞HEK293T中进行瞬时表达，再通过Ni-IDA亲和层析纯化scFv- RBP4蛋白。结果 酶切和测序结果显示，scFv-RBP4蛋白构建正确，目标蛋白纯度>90%。结论 构建的scFv-RBP4融合蛋白可以在HEK293T细胞内获得稳定表达，为后期融合蛋白的提取及功能研究打下基础。

RBP4；融合蛋白；scFv;HEK293T；构建

(ChinJLabDiagn,2017,21:1082)

子痫前期(preeclampsia,PE)是一种妊娠相关的疾病，通常因妊娠20周后出现高血压及蛋白尿等症状，占妊娠总数的3-8%[1]。临床上处理子痫前期主要是终止妊娠和对症处理，由于缺乏有效的预测手段和防治对策，使子痫前期成为孕产妇死亡的主要原因。其发病机制尚不十分明确，现在被广泛接受的假说是具有侵袭性的绒毛外滋养细胞侵袭母体子宫内膜及肌层，并重塑子宫螺旋动脉，最终提供有效稳定的胎盘血流，在胎盘形成过程中，发挥至关重要的作用。因此，如果绒毛外滋养细胞侵袭不足，诱发螺旋动脉重塑失败，最终可导致胎盘浅着床[2]，引起子痫前期。人……