LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞*

2017-06-19毛旭华汤俊明乔国洪冯斯依韩晓井昶雯

临床检验杂志 2017年5期

关键词：意义差异检测

毛旭华，汤俊明，乔国洪，冯斯依，韩晓，井昶雯

(1.宜兴市人民医院检验科，江苏宜兴 214200；2.南京医科大学人类功能基因组实验室，南京 211166； 3.南京医科大学附属肿瘤医院，江苏省肿瘤防治研究所，江苏省肿瘤医院临床肿瘤实验中心，南京 210009)

·调查研究·

LXR异常激活上调p27蛋白致胰岛β细胞周期阻滞*

毛旭华1，汤俊明1，乔国洪1，冯斯依1，韩晓2，井昶雯3

目的探讨肝X受体(liver X receptors, LXR)激动剂对小鼠胰岛β细胞系MIN6的作用。方法 LXR激动剂T0901317作用于MIN6细胞后，CCK-8法检测细胞活力；流式细胞仪检测细胞周期变化；实时定量RT-PCR法检测S期激酶相关蛋白2(Skp2)和p27 mRNA的表达水平；western blot检测Skp2和p27蛋白的表达情况。结果与control组相比，1、5和10 μmol/L药物处理后的细胞存活率分别为(98.54±0.94)%、(87.03±0.93)%和(75.57±1.85)%，各组间差异有统计学意义(F=301.90,P<0.01)。与control组G1期(35.93±2.25)%和S期(52.87±1.19)%相比，1、5和10 μmol/L药物处理组G1期细胞比例分别为(38.45±0.91)%、(45.46±1.34)%和(53.28±1.14)%，差异有统计学意义(F=80.83,P<0.01)。S期细胞比例分别为(48.65±0.85)%、(36.31±1.37)%和(31.45±1.22)%，差异有统计学意义(F=221.30,P<0.01)。10 μmol/L T0901317处理组p27蛋白表达水平(2.84±0.14)明显高于control 组 (2.28±0.10)，差异有统计学意义(t=4.54,P<0.05)。但两组间p27 mRNA 水平差异无统计学意义(t=0.28,P>0.05)。10 μmol/L T0901317下调Skp2 mRNA(0.52±0.02,t=29.22,P<0.01)和蛋白质水平(相对灰度值为0.98±0.12，control 组为1.89±0.01，t=10.98,P<0.01)。以对照组(100%)为参照，转染组、药物处理组和干扰组的细胞存活率分别为(100.97±1.08)%、(75.03±1.83)%和(86.67±2.45)%，与对照组比较，转染组间差异无统计学意义(t=1.542,P>0.05),药物处理组细胞活力下降(t=23.58,P<0.01)；药物处理组和干扰组间差异亦有统计学意义(t=7.77,P<0.01)。结论 LXR异常激活可导致胰岛β细胞增殖抑制，p27蛋白表达量增加，其机制可能为降解调控p27蛋白的Skp2 mRNA和蛋白质表达水平下降。

2型糖尿病；肝X受体激动剂；p27；S期激酶相关蛋白2；细胞周期阻滞

肝X受体(liver X receptors, LXR) 是调节脂质代谢、细胞增殖和凋亡的重要核受体家族成员。多项研究表明，LXR异常激活能抑制多种肿瘤(如卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌等)的细胞增殖，诱导细胞凋亡[1-2]。本研究旨在用LXR激动剂T0901317刺激小鼠胰岛β细胞系MIN6，通过CCK-8法和流式细胞仪检测其细胞活力和细胞周期改变，分析LXR异常激活对胰岛β细胞活力的影响；并通过检测Skp2、p27 mRNA和蛋白质水平，探讨其主要的分子作用机制。