余乃通，周启林，罗志文，胡福初，张治礼，刘志昕

（1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，海南 海口 571101；2.海南省农业科学院热带果树研究所/海南省热带果树生物学重点实验室，海南 海口 571100）

仙人掌总RNA提取方法的改进与分析

余乃通1，周启林1，罗志文2，胡福初2，张治礼2，刘志昕1

（1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所/农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室，海南 海口 571101；2.海南省农业科学院热带果树研究所/海南省热带果树生物学重点实验室，海南 海口 571100）

利用亚硫酸钠分别与TRIzol试剂、RNA plant plus Reagent试剂、BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂、艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂和OMEGA Plant RNA试剂结合的方法，均可获得高质量的仙人掌茎总RNA。反转录成cDNA，RT-PCR结果显示，5种方法提取的总RNA反转录后均能特异性扩增到matK基因。使用TRIzol试剂盒、RNA plant plus Reagent试剂盒和艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA质量相对较高，在cDNA以1∶100稀释时能检测到matK基因；而使用BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂盒或OMEGA Plant RNA试剂盒时，灵敏度稍低，在cDNA以1∶10稀释时，能检测到目的基因。利用亚硫酸钠结合不同植物总RNA提取试剂盒进行比较研究，为后续制备仙人掌茎高质量cDNA文库及其分子生物学研究奠定基础。

仙人掌；RNA提取；RT-PCR；灵敏度检测

仙人掌（Opuntia stricta （Haw.） Haw. var. dillenii （Ker-Gawl.） Benson）是仙人掌科仙人掌属的一种常见观赏性双子叶植物，别名有观音掌、霸王、火掌等。仙人掌属多年生植物，肉质灌木，呈茎柱状、球状或扁平状，肉质带刺，叶退化［1］。仙人掌具有喜光、耐热、耐旱和耐瘠等特点，其最适生长温度为20～30℃，主要生长在热带和亚热带地区，在中国主要分布在南方各地区，如云南、贵州、四川、广东、海南等省份。……