马大杂种相思组培快繁技术研究

2017-06-01徐军杰卢爵广袁徐澜

种子科技 2017年5期

关键词：杂种腋芽外植体

徐军杰，卢爵广，袁徐澜

（湛江市农业科学研究院，广东湛江524094）

马大杂种相思组培快繁技术研究

徐军杰，卢爵广，袁徐澜

（湛江市农业科学研究院，广东湛江524094）

本试验选择马大杂种相思20年生抗风直干型单株，借助扦插繁殖技术获得足够数量的试验材料，再以当年新生枝条的带腋芽茎段作为外植体开展试验，旨在提高马大杂种相思的繁殖效率。经研究发现，最适宜的消毒方法为15 min消毒以及30 s乙醇处理，污染率为6.58%，存活率为78.08%。质量浓度1.0～1.5 mg/L，增殖倍数达到3倍，芽长势较好；当NAA浓度为0.1 mg/L时，增殖倍数最大，芽的长势优异。当在IBA 6 000 mg/L培养4～8 h，再放入MS进行培养，能够实现生根率100%，同时幼苗生长旺盛，为最佳处理方法。试验结果表明，外植体的消毒效果既与消毒剂处理有密切关系，同时还受到外植体采集时间以及采集部位等因素影响，增殖效果与6-BA、NAA浓度有关。随着6-BA倍数的增加，增殖倍数呈上升趋势；随着NAA浓度的增加，芽体生长状况逐渐变好。因此，借助高质量浓度激素进行浸泡处理，生根效果理想，不仅有着较高的生根率，生根数也较多。

马大杂种相思；组织培养；快速繁殖技术

马大杂种相思是一种速生树种，引进自澳大利亚，属含羞草科金合欢属，与根瘤菌共生有着固氮的作用，能够在氮元素稀少的土壤中生存，抗瘠薄优势非常显著，同时可以涵养水源。这种树的枝干通直，且分支较为细小，在城市绿化中有着非常好的应用，对于生态混交林的种植有着显著的促进作用，目前在我国南方种植较为广泛[1]。

现阶段在马大杂种相思组培快繁技术的研究方面虽然已经取得了一定的进展，但是还存在一定的问题。首先在母株的选择方面，缺乏对优良性状母株选择的重视；其次在培养方面，目前还无法实现高倍增殖培养，芽苗质量无法得到有效的保证，能够作为生根诱导的增殖芽数量十分稀少，移栽的存活率较低[2]。

本文选择马大杂种相思多年生试验林中的优秀种树，借助立体快繁技术进行研究，希望能使快繁技术向着高效、高质方向发展，为马大杂种相思的选种以及推广打下良好的基础。

1 材料与方法

1.1 植株来源和试验材料

选择马大杂种相思20年生抗风直干型单株，借助扦插繁殖技术获得足够数量的试验材料，再以当年新生枝条的带腋芽茎段作为外植体开展试验。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体消毒和初代培养

首先要确定最佳消毒时间，用0.1%升汞溶液在外植体处理9 min、12 min、15 min后，再用乙醇对其分别处理5s、15s、30s，最后使用无菌水进行4～6次的冲洗。

在进行外植体部位的选择时，分别选择枝条1～2节、3～5节、6～8节嫩茎，剪取1～2 cm带有腋芽的茎段。

将外植体接种于MS培养基，这3种处理方式分别接种50瓶，每瓶接种1株，在第30天对存活率以及出芽率进行统计。

1.2.2 丛生芽诱导和增殖培养

研究6-BA、NAA单因子对增殖的影响：在6-BA的选择方面，选择0.5 mg/L、1 mg/L、2 mg/L、3 mg/L 4个浓度，研究细胞分裂素效果；在NAA的选择方面，选择0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.5 mg/L3个浓度，研究生长素效果。

研究6-BA、NAA不同组合对增殖的影响：将培养基中添加的6-BA、NAA按照30∶1、15∶1、10∶1、5∶1、3∶1、2∶1等不同比例进行组合，研究不同组合配比对增殖效果的影响。

每种方式接种30瓶，每瓶接种3株，研究30 d后植物增殖倍数。

1.2.3 最佳生根方法的选择

借助高质量浓度激素进行浸泡处理，将2～3 cm长的增殖芽分别置于IBA100 mg/L、300 mg/L、600 mg/L、800 mg/L、1 000 mg/L质量浓度的培养基培养4 h、8 h，再放入1/2 MS培养基中进行培养。

每种方式接种30瓶，每瓶接种3株，研究15 d后生根率以及生根数。

1.2.4 移栽和驯化

在生根培养15 d之后，进行5～10 d的炼苗，将植株根部的培养基清除干净，再移栽至营养袋，选择黄心土作为移栽基质。

1.3 培养条件

增殖培养的培养基为MS，生根培养的培养基为1/2 MS，培养基中添加蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L，将培养基中的pH值控制在弱酸性5.5～6.5范围内，先在120℃高温高压下处理15 min，起到灭菌效果，之后的培养温度保持在室温，每天进行10～12 h的光照，保证光照强度充足。

1.4 统计学方法

用SPSS 23.0统计软件来完成统计分析工作，用（XX±XX）来表示计量资料，计量资料用t比较，计数资料用X2比较，以P＜0.05作为统计学标准，差异的显著性用LSD进行评价。

2 结果与分析

2.1 外植体消毒对初代的影响

2.1.1 不同处理时间的影响

组培外植体最理想的材料为带腋芽茎段，这种材料芽遗传不会出现太大的变异，可以有效保持亲本的优良性状。本次试验具体的消毒效果见表1。随着消毒时间的延长，污染率显著降低，植株存活率有很大的改善，最适宜的消毒方法为15 min消毒以及30 s乙醇处理，污染率为6.58%，存活率为78.08%。

表1 不同处理时间对培养效果的影响

2.1.2 不同部位外植体对培养效果的影响

外植体污染率以及芽诱导率很大程度上受到枝条木质化程度影响。木质化程度越高，污染越高，顶芽内生菌数量就少，但是材质比较脆弱，会受到消毒剂影响。枝条中上部出芽率高，同时不存在较大污染。

本次试验表明，在3～5节腋芽的污染率低，出芽率高。选择3～5个腋芽作为外植体进行研究，为无菌材料获取最佳途径[3]。

在MS培养基上进行10 d的初代培养之后，腋芽开始生长，第30天生长约2～4 cm，能够实现增殖培养的目的。

2.2 丛生芽诱导与增殖培养基的选择

2.2.1 6-BA、NAA单因子对增殖的影响

随着6-BA倍数的增加，增殖倍数呈上升趋势。质量浓度1.0～1.5 mg/L，增殖倍数达到3倍，芽长势较好；当质量浓度2.0 mg/L时，芽出现严重的玻璃化现象，有效芽数量降低。

随着NAA浓度的增加，芽体生长状况逐渐变好，当NAA浓度为0.1mg/L时，增殖倍数最大，芽的长势优异[4]。

2.2.2 6-BA、NAA不同组合对增殖的影响

按6-BA、NAA比例为15∶1时，增殖芽不仅长势健壮，而且增殖倍数较高，为最佳激素浓度比例。

2.3 生根诱导

借助高质量浓度激素进行浸泡处理，生根效果理想，不仅有着较高的生根率，同时生根数也较多。当在IBA 6 000 mg/L培养4～8 h，再放入MS进行培养，能够实现生根率100%，同时幼苗生长旺盛，为最佳处理方法[5]。

3 讨论

（1）外植体的消毒效果既与消毒剂处理有密切关系，同时还受到外植体采集时间以及采集部位等因素的影响。本次研究发现，随着消毒时间的延长，污染率显著降低，植株存活率有很大的改善，最适宜的消毒方法为15 min消毒以及30 s乙醇处理，污染率为6.58%，存活率为78.08%。

（2）增殖效果与6-BA、NAA浓度有关。本次研究发现，随着6-BA倍数的增加，增殖倍数呈上升趋势。质量浓度1.0～1.5 mg/L，增殖倍数达到3倍，芽长势较好；当质量浓度2.0 mg/L时，芽出现严重的玻璃化现象，有效芽数量降低。随着NAA浓度的增加，芽体生长状况逐渐变好，当NAA浓度为0.1 mg/L时，增殖倍数最大，芽的长势优异。

（3）借助高质量浓度激素进行浸泡处理，生根效果理想，不仅有着较高的生根率，同时生根数也较多。当在IBA6 000 mg/L培养4～8 h，再放入MS进行培养，生根率能够实现100%，幼苗生长旺盛，为最佳处理方法。

[1]易敏,黄烈健,施琼.马大杂种相思扦插育苗技术[J].福建林业科技,2014（01）：108-112.

[2]施琼,胡峰,黄烈健，等.马大杂种相思腋芽高效组培增殖体系[J].林业科学,2014（06）：55-60.

[3]施琼,胡峰,黄烈健，等.马大杂种相思组培快繁技术[J].华南农业大学学报,2015（02）：79-84.

[4]孙恒,段安安,张卫华，等.马大杂种相思无性系表型性状差异分析[J].广东林业科技,2015（01）：7-13.

[5]施琼,胡峰,黄烈健，等.马大杂种相思瓶内和瓶外生根技术研究[J].植物研究,2015（06）：891-897.