彭焱，吴翠娇，向桂玲

(1青岛大学医学院，山东青岛266021；2临沂市人民医院)

甲状腺癌组织中神经细胞黏附分子、β-catenin的表达及意义

彭焱1，2，吴翠娇1，向桂玲1

(1青岛大学医学院，山东青岛266021；2临沂市人民医院)

目的 观察甲状腺癌组织中神经细胞黏附分子(NCAM)、β-catenin的表达，探讨其在甲状腺癌发生发展中的作用。方法 取70例甲状腺癌组织和36例甲状腺良性病变组织，采用免疫组化SP法检测NCAM、β-catenin表达，分析NCAM、β-catenin表达与患者临床病理特征的关系。结果 NCAM在甲状腺癌组织中的阳性表达率低于甲状腺良性病变组织，β-catenin在甲状腺癌组织中的异常表达率高于甲状腺良性病变组织(P均<0.05)。甲状腺癌组织中NCAM阳性表达率和β-catenin异常表达率与患者的性别、年龄、肿瘤直径及病理分期均无关(P均>0.05)，NCAM阳性表达率与肿瘤淋巴结是否转移有关(P<0.05)。甲状腺癌各组织学类型中NCAM、β-catenin异常表达率比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。甲状腺癌组织中NCAM的表达与β-catenin呈负相关(r=-0.025，P<0.05)。结论 甲状腺癌组织中NCAM和β-catenin的异常表达共同参与了甲状腺癌的发生发展过程，可能成为判断甲状腺癌恶性程度、转移及预后的指标。

甲状腺癌；神经细胞黏附分子；β-catenin

甲状腺癌是头颈部最常见的恶性肿瘤，近年来甲状腺癌发病率呈上升趋势，文献报道以每年3%的速度递增[1]。典型的甲状腺癌根据其组织的砂粒体、核特征、纤维化肿瘤等可确诊，但对于特殊组织学类型、形态不典型的病变及微小癌的诊断存在困难，且与良性病变出现的乳头状增生极易发生混淆。其中部分难治性甲状腺癌如髓样癌、未分化癌等通过手术和131I、抑制TSH治疗难以获得良好的治疗效果，而放疗和化疗对于甲状腺癌的疗效均较差。神经细胞黏附分子(NCAM)在神经细胞的发育过程中具有重要作用，其表达缺失可能与某些恶性肿瘤的转移潜能和预后差密切相关。β-catenin最早作为黏附因子被发现，其主要介导细胞间黏附和参与基因的表达。本研究通过检测甲状腺癌及甲状腺良性病变组织中NCAM、β-catenin的表达，探讨其在甲状腺癌发生发展过程中的作用。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2008年1月～2015年12月在我院行手术治疗的甲状腺癌患者70例(观察组)，男22例、女48例，年龄20～71岁、平均40岁。术前未行放化疗及其他生物学治疗。其中甲状腺乳头状癌33例，甲状腺滤泡癌15例，甲状腺髓样癌12例，未分化甲状腺癌10例。另取20例结节性甲状腺肿和16例甲状腺腺瘤作为对照组。

1.2 NCAM、β-catenin检测 将标本用石蜡包埋，连续4 μm厚切片。采用免疫组化SP法检测NCAM、β-catenin水平，具体操作步骤按试剂说明书进行。切片抗原修复采用高压锅高温修复，封闭。滴加一抗(鼠抗人CD56稀释度为1∶65，鼠抗人β-catenin稀释度为1∶65，均为Abcam公司产品)，4 ℃过夜，滴加即用型生物素化二抗，37 ℃孵育20 min，随即滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37 ℃孵育20 min，DAB显色，苏木精复染，中性树脂封片，显微镜下观察。以封闭血清代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 NCAM以细胞膜染成棕黄色为阳性，阳性细胞数>10%为阳性，≤10%为阴性。β-catenin以细胞质、细胞核或细胞膜上出现棕黄染色为阳性，参照文献[2]标准，从细胞膜、细胞质、细胞核三方面判断β-catenin的分布特征：细胞膜阳性表达细胞百分数>70%为正常表达，反之为表达减弱或缺失；胞质或胞核阳性表达细胞百分数>10%为异位表达；表达减弱或缺失以及异位表达统称为异常表达。每张切片镜下随机选取10个视野(×200)，每个视野计数100个甲状腺滤泡上皮细胞，计算各视野中阳性细胞所占百分比，取平均值。

1.4 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。率的比较采用χ2检验，相关性分析采用Spearman相关。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组NCAM阳性表达率、β-catenin异常表达率比较 观察组NCAM阳性3例，阳性表达率为4.26%；对照组NCAM阳性33例，阳性表达率为91.67%。观察组NCAM阳性表达率低于对照组(P<0.05)。观察组β-catenin异常表达58例，异常表达率为82.56%；对照组β-catenin异常表达3例，异常表达率为8.33%。观察组β-catenin异常表达率高于对照组(P<0.05)。

2.2 甲状腺癌组织中NCAM、β-catenin表达与患者临床病理特征的关系 观察组NCAM阳性表达率与淋巴结转移有关(P<0.05)，与性别、年龄、肿瘤直径及病理分期均无关(P均>0.05)；β-catenin异常表达率与性别、年龄、肿瘤直径、病理分期、淋巴结转移均无关(P均>0.05)。见表1。

表1 NCAM、β-catenin表达与甲状腺癌临床病理特征的关系

2.3 甲状腺癌组织中NCAM与β-catenin表达的相关性 67例NCAM阴性的甲状腺癌组织中，β-catenin阳性55例(82%);58例β-catenin阳性的甲状腺癌组织中,NCAM阴性55例(95%)。相关性分析显示，甲状腺癌组织中NCAM与β-catenin的表达呈负相关(r=-0.025，P<0.05)。

3 讨论

甲状腺癌多起病隐匿、进展缓慢，初期症状和体征与一些良性肿瘤无明显的区别，极易误诊。寻找特异性肿瘤标记物，建立可靠、可行的检测甲状腺癌的手段，是甲状腺癌研究的热门领域[3]。从分子水平认识细胞信号传导通路异常在甲状腺癌细胞发生发展、侵袭转移中的作用，可以为甲状腺癌的防治提供新的思路。

NCAM属于免疫球蛋白超家族，在来源于神经外胚层的细胞和组织中广泛存在。NCAM抗原正常表达于神经元、星形细胞、NK细胞和少数活化的T淋巴细胞等，可对肿瘤细胞的迁移和肿瘤相关淋巴管的形成产生影响[4]。El Demellawy等[5]报道，NCAM在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈阴性，而阳性表达于除癌以外的多数病变和良性肿瘤，其特异性接近100%。Ozolins等[6]发现，NCAM在甲状腺乳头状癌组织中的表达呈阴性，仅在周围的正常组织中出现表达，而在甲状腺腺瘤和甲状腺肿中表达呈阳性；认为NCAM可以用于辅助鉴别甲状腺良恶性病变。胡孟钧等[7]研究表明，NCAM在甲状腺乳头状癌中的阳性率为16%，在良性乳头状增生中的阳性率为68%。Scarpino等[8]研究发现，NCAM在正常甲状腺组织和良性甲状腺病变中多数有表达，但在多数甲状腺癌中表达降低。进一步的研究表明CD56的失表达可作为甲状腺乳头状癌的鉴别诊断要点[9，10]。本研究显示，NCAM在甲状腺癌组织中70例样本仅3例阳性，阳性表达率为4.26%，而在结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤组织中阳性表达率高达91.67%，证实NCAM在甲状腺癌中存在表达缺失的现象。NCAM阳性表达与肿瘤淋巴结转移相关，而与性别、年龄、肿瘤直径及病理分期无关，表明在淋巴结转移的甲状腺癌中NCAM阳性表达率更低，可能与甲状腺癌转移潜能和预后差相关。

甲状腺癌的发生、发展和浸润是一个涉及多分子相互作用的多阶段的复杂过程。在此过程中，不同功能的基因对细胞产生的影响促使细胞癌变，加速肿瘤发展，其中原癌基因的过度表达、肿瘤抑制基因的突变等均与甲状腺癌发生、发展密切相关[11]。β-catenin广泛存在于各类型细胞，如内皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞，对这些细胞的增殖、分化和凋亡等方面有重要的调节。β-catenin基因是原癌基因，其编码的β-catenin蛋白与胞膜上的钙黏蛋白E相结合，共同调节细胞之间的的同质性黏附，在Wnt经典信号途径中起着枢纽作用[12]。杨鹭等[13]研究表明，β-catenin在许多恶性肿瘤如乳腺癌中表达上调，且与不良预后相关。刘瑞等[14]的小鼠黑色素瘤B16-F0细胞增殖实验证实，NCAM能够通过调控β-catenin促进小鼠黑色素瘤细胞增殖，NCAM对β-catenin信号通路的影响完全独立于经典的Wnt信号通路。NCAM、β-catenin在甲状腺侵袭转移方面具有协同促进作用，可能存在一条传导通路，使NCAM通过调控β-catenin来掌控黑色素瘤细胞的增殖。贾金良等[15]报道，分化型甲状腺癌组织中的β-catenin蛋白表达率为67.31%，明显高于正常甲状腺组织的20.00%。本研究通过免疫组化法检测甲状腺癌组织与甲状腺良性肿瘤中的β-catenin蛋白表达，结果显示甲状腺癌组织中β-catenin的异常表达率高于结节性甲状腺肿和甲状腺腺瘤组织，提示β-catenin可能对甲状腺癌的浸润、转移有促进作用。β-catenin异常表达率在肿瘤淋巴结有无转移及病理分期之间差异无统计学意义；其在未分化甲状腺癌中异常表达率高于甲状腺癌其他组织学类型，但差异也没有统计学意义，需要加大样本量进一步研究。进一步分析NCAM与β-catenin的相关性发现，二者表达呈负相关。这两种蛋白表达的反向平衡现象，提示NCAM、β-catenin在甲状腺癌的发生、浸润及转移中关系密切。

综上所述，甲状腺癌组织中NCAM阳性表达和β-catenin蛋白异常表达共同参与了甲状腺癌的发生发展过程，可能成为判断甲状腺癌恶性程度、转移及预后的指标。

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吴翠娇(E-mail: wucjzr@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.06.035

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1002-266X(2017)06-0098-03

2016-10-15)