何健民　刘忆明　杨泽兴

摘 要 采用微波辅助法对小叶米仔兰的叶中的黄酮类化合物进行提取，并利用单因素与正交实验相结合，得出最佳提取工艺条件为：料液比1：30，乙醇体积分数为50%，微波功率350W，提取时间50s，此条件下小叶米仔兰叶总黄酮的含量为3.91%。

关键词 总黄酮 微波 小叶米仔兰

小叶米仔兰（AglaiaodorataLour.var.microphyllinaC.DC.Monogr.）是楝科米仔兰属植物。原产海南，在我国南方各省被作为一种芬芳类观赏植物广泛栽培。海南的黎族人民将其用于治疗跌打损伤。文献报道小叶米仔兰的枝条具有抗菌活性，米仔兰属的植物碧绿米仔兰、红果米仔兰等都具有一定的生物活性，而未见对小叶米仔兰的叶的研究报道。黄酮类化合物在降脂、抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎等方面具有药理作用。常见黄酮的提取方法有溶剂法、超声辅助法、微波辅助法等，而微波辅助法具有方便、省时、节能、提取率高等优点，是一种高效的植物总黄酮提取技术。本研究采用微波辅助法对小叶米仔兰的叶中总黄酮的提取工艺进行探讨，采用单因素和正交实验相结合得出最佳的工艺条件，以期为小叶米仔兰的综合利用提供条件。

1材料与方法

1.1材料与试剂

小叶米仔兰叶，采自云南保山，清洗，干燥，粉碎，过80目筛，备用；芦丁标准品购自阿拉丁试剂公司；所用试剂亚硝酸钠、氯化铝、氢氧化钠、乙醇等均为国产分析纯试剂；所用水为蒸馏水。

1.2仪器与设备

旋风式粉碎磨（杭州麦哲仪器有限公司），MW20-M605微波炉（广东欧派集团有限公司），电子天平（奥豪斯仪器上海有限公司），721型可见光分光光度计（上海菁华科技有限公司），2XZ-1型旋转式真空泵（南京真空泵厂），旋转蒸发仪（东京理化N-1001D）。

1.3实验方法

1.3.1芦丁标准曲线的绘制

参照文献报道方法稍作改进，用721可见分光光度计在510nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。

1.3.2小叶米仔兰叶总黄酮含量的测定

（1）样品液的制备。

准确称取小叶米仔兰叶原料1.0000g，然后加入体积分数为50%的乙醇30mL，放入微波炉中，在微波功率为350W下进行间歇式微波加热，每提取10s暂停一次，冷却后再加热，共加热提取40s。提取完后抽滤并用少量50%乙醇洗涤滤渣，取滤液，然后用体积分数为50%的乙醇定容至50mL容量瓶中，得小叶米仔兰叶总黄酮的样品液，避光保存。

（2）总黄酮含量的测定。

准确吸取1.00mL样品溶液至于10mL比色管中，再按绘制标准曲线的方法测定吸光度，对照回归方程得到总黄酮浓度，然后计算出小叶米仔兰叶总黄酮含量。黄酮得率（%）=（提取液中黄酮含量/样品质量）€？00%。

1.3.3單因素实验条件

选择对小叶米仔兰叶总黄酮得率有影响的4个因素，即料液比（A）、微波功率（B）、乙醇浓度（C）和提取时间（D）进行单因素实验。①设定乙醇浓度（体积分数50%）、微波功率（350W）、提取时间（40s），选择料液体积比（1：20、1：25、1：30、1：35、1：40）。②设定料液比（1：30）、提取时间（40s），设定乙醇浓度（体积分数50%）、料液比（1：20）、提取时间（40s），选择5种不同微波功率（70、210、350、490、700W）。③设定料液比（1：30）、微波功率（490W）、提取时间（40s），分别选择体积分数为（20%、30%、40%、50%和60%）的乙醇作为溶剂。④选择5种提取时间（30、40、50、60、70s）、乙醇浓度40%、料液比1：30、微波功率（490W）。在上述条件下按1.3.2法进行小叶米仔兰叶总黄酮的提取，并计算总黄酮得率。

1.3.4正交实验设计

为进一步综合考察各因素的相互影响及得出最佳的提取工艺条件，根据单因素实验结果，选择上述4个因素的较优水平，按L9（34）设计进行正交实验。实验设计如表1所示。

2结果与分析

2.1芦丁标准曲线绘制

以吸光度A为纵坐标，芦丁溶液浓度C为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：A=8.0725C+0.0532，R2=0.9992。结果表明，芦丁的含量在0.01g/L-0.09g/L之间时，线性关系良好。

2.2单因素实验

2.2.1料液比对总黄酮得率的影响

料液比对总黄酮得率的影响见图2，由图可知。当料液比较小时，总黄酮得率随着料液比的增加而增大，当料液比超过1：30时，总黄酮得率随之下降。因此，选用的最佳料液比为1：30。

2.2.2微波功率对总黄酮得率的影响

微波功率对总黄酮得率的影响见图3，当微波功率在70-490W时，得率随功率的增大而增大。当功率超过490W后，得率下降。因此，本实验选定微波提取功率为490W。

2.2.3乙醇浓度对总黄酮得率的影响

乙醇浓度对总黄酮得率的影响见图4，当乙醇浓度小于40%时，随着乙醇浓度的增加，总黄酮得率也随之增加；当体积分数为40%时，得率最高，当体积分数大于40%时，随着乙醇体积分数的增加得率随之下降。因此，本实验选择乙醇体积分数为40%。

2.2.4微波时间对总黄酮得率的影响

微波时间对总黄酮得率的影响见图5，当提取时间小于50s时，黄酮的得率随提取时间的增加而提高，当提取时间为50s时得率达最大，当增加提取时间，黄酮得率随之下降。因此，延长或减少提取时间，都不利于总黄酮的提取。本实验选最佳提取时间为50s。

2.3正交实验结果

正交实验因素水平表见表2，通过数据分析可知，RA>RD>RC>RB，各因素对小叶米仔兰总黄酮得率的影响大小依次为：料液比（A）>微波时间（D）>乙醇浓度（C）>微波功率（B）。微波辅助提取的优化工艺条件是A2B2C3D2，即料液比为1：30，乙醇浓度为50%，提取时间50s，微波功率为350W。按此工艺条件下进行了3次验证实验，总黄酮得率分别为3.90%，3.88%和3.95%，平均3.91%。

表2：微波辅助提取小叶米仔兰叶总黄酮的L9（34）正交实验结果表

3结论

微波辅助法对小叶米仔兰叶中总黄酮的提取是一种高效的的方法。小叶米仔兰叶根中总黄酮的微波提取工艺，受料液比、微波功率、乙醇体积分数、提取时间和间隔时间的影响，通过单因素实验和正交实验得出了最佳提取工艺条件为料液比1：30，乙醇体积分数为50%，微波功率350W，提取时间50s。此条件下小叶米仔兰叶总黄酮的含量为3.91%。

参考文献

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