李亚楠，赵兵令，王海东，陈天直，刘颖，常露程，董常生

（山西农业大学，山西太谷 030801）

内皮素3对不同毛色绵羊黑色素细胞的影响

李亚楠，赵兵令，王海东，陈天直，刘颖，常露程，董常生

（山西农业大学，山西太谷 030801）

【目的】探索内皮素3（EDN3）对来源于不同毛色体外培养的黑色素细胞产生黑色素作用机制及差异的影响。【方法】体外培养不同毛色皮肤来源的黑色素细胞，通过MTT法检测不同细胞在EDN3影响下的增殖率，分别提取两种细胞的总RNA和总蛋白，总RNA经反转录合成cDNA，采用实时荧光定量PCR方法检测EDN3对两种细胞内EDNRB、NRas及TYR在mRNA水平相对表达量的影响，总蛋白通过Western blot方法检测EDN3对两种细胞内EDNRB、NRas及TYR在蛋白水平的表达量是否发生变化，结果均使用SPSS19.0软件进行差异显著性分析。【结果】MTT法测得EDN3对黑白两种来源的黑色素细胞的增殖均产生促进作用，实时荧光定量PCR结果显示添加EDN3的白色来源细胞内EDNRB mRNA的相对表达量是正常细胞组的1.7992倍，NRas是正常细胞组的1.8536倍差异极显著(P<0.01)，但TYR mRNA的相对表达量未发生明显变化；添加EDN3的黑色来源细胞内EDNRB mRNA的相对表达量是正常细胞组的2.2512倍，NRas是正常细胞组的1.3859倍，TYR是正常细胞组的15.5710倍差异极显著(P<0.01)；Western blot结果显示添加 EDN3的白色来源细胞内 EDNRB 蛋白表达量是正常细胞组的3.0827倍差异极显著(P<0.01)，NRas是正常细胞组的1.2936倍差异显著(P<0.05)，TYR蛋白表达量未发生明显变化；添加EDN3的黑色来源细胞内EDNRB 蛋白表达量是正常细胞组的3.9800倍差异极显著(P<0.01)，NRas是正常细胞组的1.3658倍差异显著(P<0.05)，TYR是正常细胞组的1.8498倍差异显著(P<0.05)。【结论】EDN3促进白色来源的黑色素细胞增殖但对色素合成的限速酶TYR未产生促进作用；EDN3促进黑色来源的黑色素细胞增殖并可能促进黑色素生成。

内皮素3（EDN3）；绵羊；毛色；黑色素细胞

0 引言

【研究意义】内皮素（endothelin，EDN）是一类由内皮细胞合成分泌的活性肽包括 EDN1、EDN2、EDN3，各亚型的功能因分布部位不同而有一定的差异，主要作用为参与血管扩张剂的释放及促进细胞有丝分裂[1-3]。EDN3对心血管系统的稳定及血压的调节有一定的作用[4]。在毛色形成的主要部位，EDN3由角化细胞及内皮细胞合成分泌，并通过EDNRB与黑色素细胞结合通过一系列的分子调控，最后作用于MITF（小眼畸形转录因子）从而影响黑色素的合成及转运[5]。……