张露，朱世城，郑好，沈祺达，王世贵，唐斌

（杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州 310036）

褐飞虱海藻糖酶基因在表皮几丁质代谢中的调控作用

张露，朱世城，郑好，沈祺达，王世贵，唐斌

（杭州师范大学生命与环境科学学院，杭州 310036）

【目的】昆虫海藻糖酶能够调控几丁质代谢并控制蜕皮过程。本研究通过 TRE表达被抑制后，检测褐飞虱(Nilaparvata lugens)蜕皮状况、几丁质含量及几丁质合成酶（chitin synthase，CHS）和几丁质酶（chitinase，Cht）基因表达情况，探究不同的海藻糖酶（trehalase，TRE）在褐飞虱表皮中对几丁质代谢的调控作用。【方法】采用RNAi技术，以实验室饲养种群褐飞虱为材料，通过向其体内注射双链RNA（dsRNA）分别抑制单个海藻糖酶基因或同时抑制多个海藻糖酶基因，注射48 h后通过Trizol法提取褐飞虱总RNA，反转录试剂盒合成第一链DNA后采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测该基因的表达情况，确定RNAi效果。氢氧化钾法测定48 h褐飞虱整体几丁质含量变化并对蜕皮困难虫体进行拍照；最后采用qRT-PCR检测褐飞虱CHS和Cht在mRNA水平上的相对表达量变化，分析TRE在调控几丁质代谢中的作用。【结果】与注射dsGFP相比较，其余各注射组褐飞虱整体几丁质含量显著下降，其中dsTRE1混合注射组与Validamycin注射组呈极显著下降，同时褐飞虱出现蜕皮困难等现象。qRT-PCR检测结果显示单个TRE的dsRNA注射后该基因的表达被抑制，但是部分TRE的表达有互补性上升。其中TRE1-2和TRE2在各注射组处理下表达均下降，dsTRE1s对TRE2的表达也有抑制效果，整体上dsTRE1混合注射组和海藻糖酶抑制剂Validamycin抑制效果明显；dsTRE注射组抑制CHS表达效果不明显，Validamycin能够显著降低CHS1和CHS1a在表皮中的表达，且2种dsTRE1注射后CHS1表达在上升，dsTRE1-2注射后表皮中的CHS1a的表达上升；……