郑学伟，SHAH Syed Tariq，范术丽，魏恒玲，庞朝友，李鸿彬，喻树迅

（1石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832000；2中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室，河南安阳 455000）

陆地棉转录因子GhNAC7的克隆及功能分析

郑学伟1,2，SHAH Syed Tariq2，范术丽2，魏恒玲2，庞朝友2，李鸿彬1，喻树迅2

（1石河子大学生命科学学院，新疆石河子 832000；2中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室，河南安阳 455000）

【目的】从陆地棉中克隆GhNAC7，分析其结构和功能，研究其在棉花不同组织中以及叶片不同发育时期的表达量。并转入拟南芥进一步探究其在棉花叶片衰老过程中的作用。【方法】利用中国农业科学院棉花研究所棉花生物学国家重点实验室建立的棉花衰老叶片cDNA文库中的序列，获得1个含有NAM结构域的EST，使用Oligo 6.71设计引物，重新在陆地棉叶片cDNA中进行克隆。使用Gene Structure Display Server软件分析GhNAC7结构，使用在线工具PlantCARE分析启动子序列，利用在线工具GenScan进行氨基酸序列翻译。同时，利用拟南芥基因组数据库（TAIR）进行序列比对，选取得分较高的NAC家族基因，使用MEGA 6.06软件和GeneDoc软件进行进化树分析和氨基酸比对。以XbaⅠ和SacⅠ为酶切位点构建35S::GhNAC7-GFP融合表达载体，分析其在洋葱表皮细胞中的瞬时表达，进行亚细胞定位。利用实时荧光定量PCR技术分析GhNAC7在棉花不同组织、不同叶片发育时期以及在200 μmol·L-1ABA调控下的表达量。通过构建pGhNAC7-GUS融合表达载体并转拟南芥，分析其启动子特异性。以EcoRⅠ和SalⅠ为酶切位点，利用pBI101和pBI121载体，分别构建融合表达载体并转拟南芥进行过表达分析。【结果】从陆地棉中成功克隆GhNAC7，其全长为1 064 bp，包含3个外显子，2个内含子。……